MISE AU POINT DE TECHNIQUES ANALYTIQUES DE CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE A HAUTE PERFORMANCE EVALUANT LA PURIFICATION D'UN PEPTIDE DE SYNTHESE ET D'UNE PROTEINE RECOMBINANTE PDF Download
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Author: ARMELLE.. DE KERMOYSAN
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Book Description
Author: ARMELLE.. DE KERMOYSAN
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Author: Dermot Walls
Publisher: Methods in Molecular Biology
ISBN: 9781493981915
Category : Science
Languages : en
Pages : 438
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This second edition expands on the previous edition with new chapters that are suitable for newcomers, as well as more detailed chapters that cover protein stability and storage, avoiding proteolysis during chromatography, protein quantitation methods including immuno-qPCR, and the challenges that scale-up of production poses to the investigator. Many of the chapters also discuss generation and purification of recombinant proteins, recombinant antibody production, and the tagging of proteins as a means to enhance their solubility and simplify their purification on an individual scale or in high-throughput systems. This book also provides readers with chapters that describe not just the more commonly used methods, but also recently developed approaches such as proteomic/mass spectrometric techniques and Lectin-based affinity chromatography. Written in the highly successful Methods in Molecular Biology series format, chapters include introductions to their respective topics, lists of the necessary materials and reagents, step-by-step, readily reproducible laboratory protocols, and tips on troubleshooting and avoiding known pitfalls. Cutting-edge and thorough, Protein Chromatography: Methods and Protocols, Second Edition is a valuable resource for anyone who is interested in the field of protein chromatography.
Author: Henri Wajcman
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Category : Amino acid sequence
Languages : en
Pages : 232
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Author: Isabelle Gaillard
Publisher:
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Category :
Languages : fr
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DEPUIS LA MISE AU POINT DES TECHNIQUES DE FORMATION DES LIGNEES D'HYBRIDOMES, DES EFFORTS IMPORTANTS SONT FOURNIS POUR AMELIORER LA PRODUCTIVITE DES ANTICORPS MONOCLONAUX ET POUR MIEUX COMPRENDRE LE METABOLISME CELLULAIRE. LES METHODES ANALYTIQUES JOUENT UN ROLE IMPORTANT DANS LE CONTROLE DES PROCEDES EN PERMETTANT LA DETERMINATION QUANTITATIVE ET QUALITATIVE DE PLUSIEURS PARAMETRES ET VARIABLES. L'OBJECTIF GENERAL DE CETTE ETUDE CONSISTE A CONTRIBUER A L'AMELIORATION DE LA MAITRISE DES BIOPROCEDES EN PROPOSANT UNE METHODE ANALYTIQUE CAPABLE DE QUANTIFIER LES PROTEINES PRESENTES DANS LES CULTURES D'HYBRIDOMES. AFIN D'ATTEINDRE CET OBJECTIF, LES POTENTIALITES DE L'HPLC ONT ETE TESTEES. LES PROTEINES CONSIDEREES DANS CETTE ETUDE SONT D'UNE PART, LES COMPOSES PROTEIQUES PROPRES AU MILIEU DE CULTURE ET D'AUTRE PART, LES ANTICORPS MONOCLONAUX SECRETES PAR LES CELLULES. LA PREMIERE PARTIE DE CETTE ETUDE PRESENTE L'OPTIMISATION DES CONDITIONS OPERATOIRES DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE. LES DEUX MODES CHROMATOGRAPHIQUES MIS A PROFIT SONT L'HPLC D'AFFINITE ET LA RP-HPLC. UNE ETUDE COMPARATIVE DES PERFORMANCES DE LA METHODE PAR HPLC ET DU TEST ELISA EST EXPOSEE DANS UNE SECONDE PARTIE. LA TROISIEME PARTIE CONCERNE L'APPLICATION DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE AUX SUIVIS DES PROTEINES DE CULTURES CELLULAIRES D'HYBRIDOMES. ENFIN, LA REALISATION COUPLAGE AUTOMATISE REACTEUR-ECHANTILLONNEUR-HPLC ET SON APPLICATION A LA DETERMINATION EN LIGNE DE LA CONCENTRATION DES IGG D'UNE CULTURE DISCONTINUE, CONSTITUENT LA DERNIERE PARTIE DE CE TRAVAIL
Author: Ayat Abbood
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Languages : fr
Pages : 171
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La production de « peptides-médicaments » et de protéines recombinantes est en plein essor dans l’industrie pharmaceutique. La synthèse des peptides en phase solide conduit à la formation de substances apparentées de structure proche du peptide d’intérêt, d’où la nécessité d’un contrôle qualité rigoureux. En ce qui concerne les protéines recombinantes, leur contrôle qualité est généralement effectué par l’établissement d’une carte peptidique, qui correspond à l’analyse des fragments peptidiques issus de la digestion enzymatique de la protéine à l’aide d’une méthode séparative. Pour la détection des substances apparentées ou issus de la dégradation des peptides, des méthodes analytiques capables de distinguer des formes structurellement très proches doivent être proposées pour le contrôle qualité, à toutes les étapes du développement du produit. La chromatographie liquide haute performance (CLHP) en phase inverse est la méthode la plus utilisée pour la détermination de la pureté des peptides synthétiques ou l’établissement de la carte peptidique d’une protéine. Le but de ce travail de thèse était d’évaluer l’apport de nouvelles phases stationnaires dans l’analyse des peptides. Différents types de phases stationnaires particulaires ou monolithiques ont été étudiés : phases mixtes, d’interactions hydrophiles et d’échange d’ions. Des peptides de caractère physicochimique différents ou de structure proche (les enképhalines) ont été étudiés. L’application à la séparation d’un peptide d’intérêt (dalargine) de ses impuretés de synthèse a été réalisée.
Author: International Symposium on High Performance Liquid Chromatography of Proteins, Peptides and Polynucleotides
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Languages : en
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Author: Fabienne Lavergne-Mazeau
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Category :
Languages : fr
Pages : 106
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LA PRODUCTION A GRANDE ECHELLE DE PEPTIDES HETEROLOGUES CHEZ ESCHERICHIA COLI EST SOUVENT LIMITEE PAR L'INSTABILITE DES PRODUITS FORMES. UNE ALTERNATIVE CONSISTE A CLONER LE GENE DU PEPTIDE RECOMBINANT SOUS UNE FORME MULTIMERE, EN PHASE ET EN AMONT OU EN AVAL D'UNE SEQUENCE NUCLEOTIDIQUE CODANT UN PEPTIDE MARQUEUR. IL EN RESULTE UNE PROTEINE HYBRIDE PLUS STABLE ET PLUS FACILE A PURIFIER PAR CHROMATOGRAPHIE D'AFFINITE. SOUVENT, LA SUREXPRESSION DES PROTEINES RECOMBINANTES CONDUIT A LA FORMATION DE CORPS D'INCLUSION, AGREGATS PROTEIQUES INSOLUBLES DANS LE CYTOPLASME DE LA BACTERIE. LES CARACTERISTIQUES OPTIQUES DES CELLULES S'EN TROUVENT MODIFIEES AU POINT QU'IL EST POSSIBLE PAR L'ANALYSE DES PARAMETRES OPTIQUES FAS (DIFFUSION DE LA LUMIERE AUX PETITS ANGLES) ET RAS (DIFFUSION DE LA LUMIERE A ANGLE DROIT) DE DISTINGUER LES DEUX POPULATIONS DE CELLULES INDUITES ET NON INDUITES. LA TECHNOLOGIE DE CYTOMETRIE EN FLUX EST EMPLOYEE ICI POUR ETABLIR UNE CORRELATION LINEAIRE ENTRE LE PARAMETRE FAS ET LE TAUX DE PRODUCTION DU PEPTIDE HANP (PEPTIDE NATRIURETIQUE AURICULAIRE HUMAIN). SONT TOUT PARTICULIEREMENT ETUDIES LES PARAMETRES LIES A L'INDUCTION, (I) NOMBRE DE COPIES DU FRAGMENT ADN CLONE, (II) NATURE ET CONCENTRATION DE L'INDUCTEUR, (III) MOMENT ET DUREE DE L'INDUCTION, ET LES PARAMETRES DE PURIFICATION DE LA PROTEINE DE FUSION. DEUX CONCLUSIONS ESSENTIELLES SONT A NOTER. (I) LA CORRELATION N'EST POSSIBLE QUE POUR DES CELLULES VIABLES. LORSQUE DES CELLULES INDUITES MEURENT, L'INTENSITE DE LEUR PARAMETRE OPTIQUE DIMINUE ALORS QUE LA PROTEINE DE FUSION CONTINUE A ETRE DOSEE DANS LE MILIEU DE CULTURE. (II) LA CORRELATION EST SPECIFIQUE DE LA SOUCHE RECOMBINANTE. LA RELATION LINEAIRE ENTRE LA SURPRODUCTION DE PROTEINES HETEROLOGUES ET LES PARAMETRES OPTIQUES CELLULAIRES DOIT ETRE ETABLIE POUR CHAQUE SOUCHE BACTERIENNE SUREXPRIMANT UNE PROTEINE PARTICULIERE
Author: JEAN-MICHEL.. MENET
Publisher:
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Languages : fr
Pages : 320
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LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE-LIQUIDE CENTRIFUGE (CLLC), OU CHROMATOGRAPHIE A CONTRE-COURANT (CCC), SEPARE LES SOLUTES SELON LEUR COEFFICIENT DE PARTAGE ENTRE DEUX PHASES LIQUIDES. UN CHAMP DE FORCES CENTRIFUGES, CREE PAR DES MOUVEMENTS DE ROTATION COMPOSES, RETIENT LA PHASE STATIONNAIRE LIQUIDE DANS LA COLONNE, QUI CONSISTE EN UN TUBE OU UNE SERIE DE FINS CANAUX. CE TRAVAIL A CONSISTE A COMPRENDRE LE COMPORTEMENT DE SYSTEMES DE SOLVANTS VARIES DANS LES COLONNES DES APPAREILS DITS DE TYPE J ET DE TYPE CROSS-AXIS. POUR LE PREMIER TYPE, NOUS AVONS PROPOSE UNE CORRELATION ENTRE LES CARACTERISTIQUES DES PHASES DU SYSTEME DE SOLVANTS ET SON COMPORTEMENT DANS LA BOBINE. UNE ETUDE DE L'INFLUENCE DE LA TEMPERATURE A PERMIS DE PRECISER CES PROPRIETES. L'APPAREIL DE TYPE CROSS-AXIS ETANT RECENT, NOUS AVONS D'ABORD UTILISE LA METHODOLOGIE DES PLANS D'EXPERIENCES POUR OPTIMISER LA RETENTION DE LA PHASE STATIONNAIRE AVEC TROIS SYSTEMES DE SOLVANTS CARACTERISTIQUES. LES CALCULS NOUS ONT AUSSI PERMIS DE PRECISER LE ROLE DE CHAQUE FACTEUR ET DE PROPOSER DES INTERPRETATIONS EXPLICITANT LEUR INFLUENCE DIRECTE OU INDIRECTE SOUS FORME D'INTERACTIONS. LA DEUXIEME PARTIE EST CONSACREE A LA COMPARAISON PREALABLE DES APPAREILS DE TYPE SANKI, DE TYPE J ET DE TYPE CROSS-AXIS EN TERME DE RETENTION DE LA PHASE STATIONNAIRE, D'EFFICACITE ET DE RESOLUTION. LA PURIFICATION D'UNE PROTEINE RECOMBINANTE, LE FACTEUR DE CROISSANCE FIBROBLASTIQUE ACIDE (AFGF), A ENSUITE PERMIS DE MONTRER LES PERFORMANCES DE LA CLLC LORS DE L'UTILISATION DE SYSTEMES BIPHASIQUES AQUEUX A BASE DE POLYMERES. LA MISE AU POINT DES COMPOSITIONS DE CES SYSTEMES AINSI QUE DE L'ECHANTILLON INJECTE A PERMIS L'ETUDE A L'ECHELLE ANALYTIQUE DE L'INFLUENCE DE DIVERSES CONDITIONS OPERATOIRES (DEBIT, VITESSE DE ROTATION, TEMPERATURE) SUR LA QUALITE DE LA PURIFICATION. LA TRANSPOSITION IMMEDIATE A L'ECHELLE SEMI-PREPARATIVE A MONTRE QU'UNE PURIFICATION DE TRES BONNE QUALITE PEUT ETRE OBTENUE EN UNE SEULE ETAPE
