Étude de l'effet d'une matrice à base de collagène sur la différenciation des cellules souches de la pulpe dentaire en odontoblastes PDF Download
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Author: Maryse Boisvert
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Languages : fr
Pages : 69
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Book Description
La thérapie canalaire occasionne à la dent traitée une perte de sensibilité et de vitalité. La dent n'est plus en mesure de combattre une infection éventuelle et reste fragile. Pour une dent permanente immature nécrosée, la perte de vitalité peut mener à l'arrêt de la croissance radiculaire. La mise au point d'une technique de régénération est nécessaire pour guider le processus de différenciation des cellules souches vers le type cellulaire désiré et permettre de regagner la vitalité du tissu pulpaire. L'étude a pour but d'examiner si une matrice poreuse à base de collagène permet la différenciation des cellules souches humaines de la pulpe dentaire (CSPD) en cellules odontoblastiques. Des CSPD ont été mises en culture avec ou sans facteurs de différenciation odontoblastique, en monocouche ou en présence de la matrice collagénique. L'adhésion a été observée à 6 et à 24 h. La prolifération a été étudiée par la technique d'incorporation du bromure 3-(4,5- diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium (MTT) à 3 et 5 jours. La morphologie cellulaire a été visualisée par microscopie optique à 3 et 7 jours. La formation de tissu calcifié et l'activité de la phosphatase alcaline (ALP) ont été évaluées à 2, 3 et 4 semaines. La sialophosphoprotéine de la dentine (SPPD) et l'ostéocalcine (OC) ont aussi été examinées par transfert de protéines. Les résultats montrent que les CSPD adhèrent et prolifèrent en présence du milieu de différenciation et de la matrice de collagène. Il y a production d'ALP et de tissu calcifié en présence du milieu de différenciation et de la matrice de collagène. L'analyse protéique indique la production de SPPD et d'OC, confirmant la différenciation de CSPD en cellules odontoblastiques au contact de la matrice de collagène. La matrice de collagène pourrait offrir un microenvironnement favorisant la différenciation des CSPD en odontoblastes dans le système canalaire in vivo.
Author: Maryse Boisvert
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La thérapie canalaire occasionne à la dent traitée une perte de sensibilité et de vitalité. La dent n'est plus en mesure de combattre une infection éventuelle et reste fragile. Pour une dent permanente immature nécrosée, la perte de vitalité peut mener à l'arrêt de la croissance radiculaire. La mise au point d'une technique de régénération est nécessaire pour guider le processus de différenciation des cellules souches vers le type cellulaire désiré et permettre de regagner la vitalité du tissu pulpaire. L'étude a pour but d'examiner si une matrice poreuse à base de collagène permet la différenciation des cellules souches humaines de la pulpe dentaire (CSPD) en cellules odontoblastiques. Des CSPD ont été mises en culture avec ou sans facteurs de différenciation odontoblastique, en monocouche ou en présence de la matrice collagénique. L'adhésion a été observée à 6 et à 24 h. La prolifération a été étudiée par la technique d'incorporation du bromure 3-(4,5- diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium (MTT) à 3 et 5 jours. La morphologie cellulaire a été visualisée par microscopie optique à 3 et 7 jours. La formation de tissu calcifié et l'activité de la phosphatase alcaline (ALP) ont été évaluées à 2, 3 et 4 semaines. La sialophosphoprotéine de la dentine (SPPD) et l'ostéocalcine (OC) ont aussi été examinées par transfert de protéines. Les résultats montrent que les CSPD adhèrent et prolifèrent en présence du milieu de différenciation et de la matrice de collagène. Il y a production d'ALP et de tissu calcifié en présence du milieu de différenciation et de la matrice de collagène. L'analyse protéique indique la production de SPPD et d'OC, confirmant la différenciation de CSPD en cellules odontoblastiques au contact de la matrice de collagène. La matrice de collagène pourrait offrir un microenvironnement favorisant la différenciation des CSPD en odontoblastes dans le système canalaire in vivo.
Author: Maryse Boisvert
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La thérapie canalaire occasionne à la dent traitée une perte de sensibilité et de vitalité. La dent n'est plus en mesure de combattre une infection éventuelle et reste fragile. Pour une dent permanente immature nécrosée, la perte de vitalité peut mener à l'arrêt de la croissance radiculaire. La mise au point d'une technique de régénération est nécessaire pour guider le processus de différenciation des cellules souches vers le type cellulaire désiré et permettre de regagner la vitalité du tissu pulpaire. L'étude a pour but d'examiner si une matrice poreuse à base de collagène permet la différenciation des cellules souches humaines de la pulpe dentaire (CSPD) en cellules odontoblastiques. Des CSPD ont été mises en culture avec ou sans facteurs de différenciation odontoblastique, en monocouche ou en présence de la matrice collagénique. L'adhésion a été observée à 6 et à 24 h. La prolifération a été étudiée par la technique d'incorporation du bromure 3-(4,5- diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium (MTT) à 3 et 5 jours. La morphologie cellulaire a été visualisée par microscopie optique à 3 et 7 jours. La formation de tissu calcifié et l'activité de la phosphatase alcaline (ALP) ont été évaluées à 2, 3 et 4 semaines. La sialophosphoprotéine de la dentine (SPPD) et l'ostéocalcine (OC) ont aussi été examinées par transfert de protéines. Les résultats montrent que les CSPD adhèrent et prolifèrent en présence du milieu de différenciation et de la matrice de collagène. Il y a production d'ALP et de tissu calcifié en présence du milieu de différenciation et de la matrice de collagène. L'analyse protéique indique la production de SPPD et d'OC, confirmant la différenciation de CSPD en cellules odontoblastiques au contact de la matrice de collagène. La matrice de collagène pourrait offrir un microenvironnement favorisant la différenciation des CSPD en odontoblastes dans le système canalaire in vivo.
Author: Charlène Kichenbrand
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Face à des pertes de substance osseuse de grande étendue dépassant les capacités naturelles de régénération de l'os natif, aucune solution thérapeutique, qu'il s'agisse de l'os autologue ou du l'utilisation de substituts osseux, n'est à ce jour pleinement satisfaisante, en particulier par l'absence de cellularisation du substitut et de sa vascularisation. La création d'un substitut osseux pré vascularisé en ingénierie tissulaire osseuse pourrait dépasser ces limites et autoriser une régénération tissulaire osseuse de qualité, favorisée par une vascularisation du greffon. Notre projet visait à développer ce substitut osseux pré vascularisé en combinant un biomatériau associant éponge de collagène et hydrogel d'alginate enrichi en hydroxyapatite (HA) et colonisé par des cellules souches mésenchymateuses de la pulpe dentaire (CSM-PD). La première partie de notre travail a permis de préciser les conditions environnementales pouvant être choisies pour l'utilisation des CSM-PD en ingénierie tissulaire osseuse, telles que la densité d'ensemencement, la teneur en glucose de l'environnement et le choix de nanovecteurs. Nous avons mis en lumière que les CSM-PD n'étaient pas impactées d'une part par des nanoliposomes de lécithine de colza (utilisables pour la vectorisation de molécules bioactives), et d'autre part qu'une faible teneur en glucose pouvait induire une différenciation ostéogénique de façon aussi performante qu'une forte teneur en glucose. La deuxième partie de notre travail a consisté en l'ensemencement des CSM-PD au sein de notre biomatériau innovant associant éponge de collagène et hydrogel d'alginate enrichi en HA. Nous avons observé une potentialisation des capacités de colonisation des biomatériaux et de la différenciation ostéogénique des CSM-PD et mis en évidence la présence de précurseurs de cellules endothéliales-like. Ces résultats encourageants mettent en lumière le potentiel d'utilisation des CSM-PD combinées à un biomatériau combinant collagène et hydrogel d'alginate enrichi en HA pour l'ingénierie osseuse pré-vascularisée.
Author: Aurélien Louvrier
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Objectifs : isoler et caractériser les cellules souches de la pulpe dentaire (DPSCs -Dental Pulp Stem Cells) issues de dents matures cariées vouées à une avulsion et de les comparer aux DPSCs issues de dents de sagesse saines avulsées pour raisons orthodontiques ; évaluer la capacité des DPSCs à coloniser, proliférer et se différencier en odontoblastes fonctionnels lorsqu'elles sont cultivées au sein d'un cône de polycaprolactone (PCL) fabriqué par jet-spraying au design proche des systèmes de comblement endodontique existants. Méthode : les DPSCs ont été obtenues à partir de 9 dents matures cariées et de 12 dents de sagesse saines. Elles ont ensuite été caractérisées par cytométrie en flux et soumises à une multidifférenciation pour confirmer leur multipotentialité. Ces DPSCs ont ensuite été cultivées sur un cône de PCL dans un milieu de différenciation odontoblastique. La prolifération cellulaire, la colonisation du biomatériau et la différenciation fonctionnelle des cellules ont été évaluées histologiquement. Résultats : au sein toutes les cultures, la caractérisation phénotypique a permis de mettre en évidence un phénotype de cellules souches mésenchymateuses (CD105+, CD90+, CD73+, CDllb-, CD34-, CD45-, HLA-DR-). Aucune différence significative n'a été trouvée entre les cultures obtenues à partir des dents matures cariées et celles des dents de sagesse saines. Les DPSCs des deux origines ont pu être différenciées en ostéocytes, adipocytes et chondrocytes. L'analyse histologique des cultures au sein des cônes de PCL a montré une colonisation en surface et dans l'épaisseur du biomatériau avec un dépôt péricellulaire d'une matrice minéralisée composée de collagène de type I, de phosphatase alcaline, d'ostéocalcine et de sialophosphoprotéine dentinaire. Conclusion : les DPSCs peuvent être extraites indifféremment des dents matures cariées et des dents de sagesse saines ; elles sont capables de coloniser, proliférer au sein d'un cône de PCL prototypé à la taille d'un canal endodontique et d'être différenciées en odontoblastes fonctionnels
Author: CATHERINE.. BEGUE-KIRN
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Languages : fr
Pages : 77
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LA DIFFERENCIATION TERMINALE DES ODONTOBLASTES QUI S'EFFECTUE SELON DES GRADIENTS TEMPOROSPATIAUX EST CONTROLEE PAR L'EPITHELIUM DENTAIRE INTERNE PAR L'INTERMEDIAIRE D'UNE MEMBRANE BASALE SPECIFIQUE. CE PROCESSUS DE DIFFERENCIATION PEUT ETRE INDUIT IN VITRO EN PRESENCE DE FACTEURS DE CROISSANCE APPARTENANT A LA FAMILLE DE TGFB A LA SEULE CONDITION QUE CEUX-CI SOIENT STABILISES A PROXIMITE DES PREODONTOBLASTES COMPETENTS. SUR LE PLAN HISTOLOGIQUE, LE PHENOTYPE DES CELLULES INDUITES EST COMPARABLE A CELUI DES ODONTOBLASTES IN VIVO. TOUT COMME LES ODONTOBLASTES PHYSIOLOGIQUES, LES CELLULES DE TYPE ODONTOBLASTE EXPRIMENT LES TRANSCRITS CODANT POUR TGFB1 ET 3, BMP2 ET 4, L'OSTEONECTINE, LA SIALOPROTEINE DE L'OS (BSP) ET ACCUMULENT A LEUR POLE APICAL UNE MATRICE EXTRACELLULAIRE COMPRENANT DU COLLAGENE DE TYPE I, DE LA DECORINE ET DU BIGLYCANNE. D'AUTRE PART, LA DIFFERENCIATION DES CELLULES DE TYPE ODONTOBLASTE SE PROPAGE CONDUISANT A LA FORMATION DE GRADIENTS DE DIFFERENCIATION. L'ANALYSE PAR HYBRIDATION IN SITU DES PROFILS D'EXPRESSION DE DIFFERENTS MEMBRES DE LA FAMILLE DE TGFB ET/OU DE CERTAINES DE LEURS CIBLES POTENTIELLES IN VIVO ET IN VITRO, AINSI QUE NOS DONNEES D'INDUCTION IN VITRO, ONT PERMIS DE PRECISER LA NATURE DES EVENEMENTS CONDUISANT A LA DIFFERENCIATION DES ODONTOBLASTES. NOTRE HYPOTHESE DE TRAVAIL TRES SIMPLIFIEE EST LA SUIVANTE: UN OU DES MEMBRE(S) DE LA FAMILLE DE TGFB D'ORIGINE EPITHELIALE, IMMOBILISE(S) PAR LES COMPOSANTS MATRICIELS DE LA MEMBRANE BASALE INTERPOSEE, INTERAGIRAI(EN)T AVEC DES PREODONTOBLASTES COMPETENTS ET REGULERAI(EN)T L'EXPRESSION DE MOLECULES DE LA FAMILLE DE TGFB ET/OU DE FACTEURS DE TRANSCRIPTION COMME MSX2. LA SYNTHESE ENDOGENE DE CES MOLECULES INDUIRAIT TOUTE LA CASCADE D'EVENEMENTS CONDUISANT A LA POLARISATION CYTOLOGIQUE ET FONCTIONNELLE DES ODONTOBLASTES. DES EXPERIENCES PRELIMINAIRES IN VIVO INDIQUENT QUE LA REGULATION DU METABOLISME DES ODONTOBLASTES DANS LA DENT ADULTE (DENTINOGENESE REACTIONNELLE) ET LA DIFFERENCIATION D'ODONTOBLASTES DE DEUXIEME GENERATION (DENTINOGENESE REPARATIVE) PEUVENT ETRE REGULEES PAR DES MECANISMES VOISINS DE CEUX INDUISANT LA TRANSITION PREODONTOBLASTE-ODONTOBLASTE
Author: Mouna Nakkouch
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Languages : fr
Pages : 194
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Book Description
L'ingénierie tissulaire vise à promouvoir de nouvelles thérapeutiques substitutives pouvant pallier aux limitations biologiques ou éthiques des greffes. Le but de ce travail a été de développer un nouveau produit d'ingénierie tissulaire (PIT) destiné à la régénération osseuse comprenant une matrice tridimensionnelle poreuse constituée d'un matériau composite à base de collagène et d'alginate et des cellules souches adultes issues de la papille apicale dentaire (SCAPs) et dans un deuxième temps de caractériser la capacité de différenciation ostéoblastique de ces cellules après bioimpression assistée par laser. Nos résultats montrent que l'architecture de la composition du composite utilisé permettent la diffusion des cellules souches ainsi que leur prolifération. Cette matrice constitue un matelas cellulaire utilisable dans le cadre de la bioimpression assistée par laser. La viabilité cellulaire est préservée. Les cellules ne sont altérées ni par l'énergie du faisceau laser ni par les conditions de transfert. Les résultats préliminaires obtenus grâce à la coloration au rouge Alizarine et à l'étude de la matrice minéralisée grâce au MEB tendent à montrer que les cellules souches conservent leur potentiel de prolifération et de différenciation ostéoblastique après impression laser. En conclusion, nous avons pu montrer que la bioimpression assistée par laser SCAPs dans un matériau composite à base de collagène et d'alginate semble être une technique applicable en ingénierie tissulaire in vitro.
Author: J. P. Gage
Publisher: Butterworth-Heinemann
ISBN:
Category : Medical
Languages : en
Pages : 152
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Author: Jean-Baptiste Souron
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Languages : fr
Pages : 0
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Book Description
La pulpe dentaire est sujette à des lésions sévères faisant suite à une carie dentaire ou à un traumatisme. La thérapeutique conventionnelle préconisée alors est le traitement endodontique, qui consiste en l'exérèse de la totalité de la pulpe dentaire et le comblement de l'espace pulpaire par un matériau inerte. Ce traitement induit une fragilisation de la dent et une plus grande susceptibilité aux infections. Au cours de ce travail, nous avons mis au point une solution alternative, en proposant le remplacement de la pulpe dentaire lésée par une « pulpe équivalente » constituée de cellules souches mésenchymateuses de la pulpe ensemencées dans une matrice de collagène. Nous avons testé ce substitut pulpaire au travers d'un modèle de pulpotomie de la molaire chez le rat, à savoir l'exérèse de la totalité du parenchyme de la chambre pulpaire et conservation du réseau vasculaire radiculaire, où nous avons implanté des « pulpes équivalentes ». Notre objectif étant notamment de déterminer le devenir des cellules souches pulpaires implantées dans la dent grâce à l'imagerie nucléaire, dans ce contexte de développement d'une thérapie cellulaire. Les cellules ont été marquées à l'111Indium-oxine préalablement à leur implantation. Nous avons montré que le marquage n'avait pas d'incidence sur la viabilité et la prolifération des cellules pulpaires. Le suivi du signal s'est fait par tomographie d'émission monophotonique, couplée à un scanner spécifique du petit animal (NanoSPECT/CT, Bioscan), hebdomadairement pendant 3 semaines. Nous avons mis en évidence que l'intensité du signal SPECT était directement liée à l'intégrité des cellules, puisque que les matrices implantées avec des cellules marquées puis lysées par choc isotonique présentaient une diminution rapide de l'intensité du marquage. Grâce à la sensibilité de la méthode d'imagerie choisie, nous avons montré l'absence de diffusion majeure des cellules dans la circulation sanguine à partir du site d'implantation, ce qui pourrait constituer un risque de minéralisation ectopique lié à l'implantation de cellules souches mésenchymateuses. Par ailleurs, l'étude par histologie des processus de réparation et régénération de la pulpe dans les dents de rat a mis en évidence une prolifération abondante de cellules de type fibroblastique au sein des matrices, ainsi que la présence de nombreux vaisseaux et de nerfs dans la matrice cellularisée et à proximité. Ces résultats, non observés dans les matrices implantées avec des cellules lysées, suggéraient donc une fonctionnalité du tissu reconstruit et suggéraient que les cellules pulpaires implantées favorisaient une néovascularisation rapide de la pulpe équivalente, vraisemblablement en induisant un recrutement de cellules endothéliales à partir du réseau vasculaire radiculaire résiduel.
Author: Caroline Gorin
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Languages : fr
Pages : 0
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Book Description
La dent est un tissu vivant, confronté tout au long de la vie à de multiples agressions (caries, traumatismes...) qui peuvent entraîner la nécrose de la pulpe. La mise au point d'une «pulpe équivalente» pourrait constituer une approche thérapeutique innovante comme alternative aux traitements actuels d'endodontie. La pulpe des dents temporaires constitue un réservoir de cellules souches mésenchymateuses (SHED Stem cells from Human Exfoliated Deciduous teeth) aux potentiels de prolifération et de différenciation élevés. L'objectif global de ce travail est de reconstituer un tissu pulpaire fonctionnel en développant une pulpe équivalente (cellules pulpaires mésenchymateuses ensemencées dans une matrice 3D de collagène) pour être greffée à l'intérieur de la chambre pulpaire préalablement évidée afin de conserver la vitalité de la dent. Les objectifs spécifiques ont été : In vitro : 1) d'étudier le potentiel angiogénique des SHED comparés à des fibroblastes dermiques en conditions normoxiques et hypoxiques, 2) de déterminer la durée de pré-conditionnement hypoxique optimale pour stimuler le potentiel angiogénique des SHED, 3) de sélectionner une potentielle cytokine activant la formation de capillaires, 4) d'analyser l'effet de l'hypoxie sur l'expression des marqueurs de surfaces des SHED, et 5) de vérifier que l'hypoxie n'altérait pas le potentiel de minéralisation de ces cellules. In vivo : 1) d'évaluer, dans un modèle pré-clinique d'implantation de pulpes équivalentes en site ectopique chez la souris, l'effet du pré-conditionnement hypoxique sur le potentiel angiogénique des SHED. Ces expériences ont d'abord été conduites avec des cellules pulpaires de souris puis confirmées avec des SHED implantées dans des souris immunodéficientes, et 2) de développer des techniques d'imagerie dynamique pour suivre la néoangiogenèse dans les pulpes équivalentes implantées. Enfin, dans un objectif de transfert vers la clinique dentaire humaine, nous avons étudié l'effet d'un nouveau biomatériau à base de calcium tricalcique sur la réparation tissulaire dans un modèle de blessure pulpaire chez le rat, en comparaison aux matériaux de référence.
Author: Emmanuelle Renard (docteur en chirurgie dentaire).)
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Languages : fr
Pages : 164
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Book Description
L'étude des processus de cicatrisation à l'échelle cellulaire, met en évidence l'importance des cellules souches. Ces cellules assurent le renouvellement de leur pool cellulaire et le turn-over tissulaire. Elles ont la capacité de différencier en plusieurs types cellulaires. L'observation de réparations dentino-pulpaires après un processus pathologique, montre qu'il existe des cellules précurseurs dans la pulpe dentaire. Leur étude se fait par analyse des marqueurs de surface spécifiques. Les cellules souches de la moelle osseuse servent de modèle à ces analyses. Comme pour les cellules souches de la moelle osseuse, l'origine des cellules souches de la pulpe dentaire reste encore inconnue. De fortes similarités de marqueurs de surface avec les péricytes, nous font penser à une origine commune avec ces cellules. L'ingénierie tissulaire permettra peut-être à l'avenir d'utiliser ces cellules souches pour régénérer l'organe dentaire.
