OPTIMISATION DE LA SEPARATION ET ETUDE THERMODYNAMIQUE DU MECANISME DE RETENTION DE MOLECULES EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE ET GAZEUSE

OPTIMISATION DE LA SEPARATION ET ETUDE THERMODYNAMIQUE DU MECANISME DE RETENTION DE MOLECULES EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE ET GAZEUSE PDF Author: Yves Claude Guillaume
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Languages : fr
Pages : 77

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DANS CE TRAVAIL, NOUS METTONS EN EVIDENCE L'INTERET QUE REPRESENTE LES PLANS D'EXPERIENCE ET L'ALGORITHME SIMPLEX EN CHROMATOGRAPHIE. CETTE METHODE PERMET, EN EFFET, DE REDUIRE LE NOMBRE D'EXPERIENCES A REALISER POUR L'OPTIMISATION DE LA SEPARATION ET L'ETUDE DU MECANISME DE RETENTION DE DIVERSES MOLECULES. APRES AVOIR RAPPELE QUELQUES POINTS THEORIQUES SUR CE PROCEDE DE CALCUL, NOUS AVONS REPERTORIE, DANS LE PREMIER CHAPITRE DE CE MEMOIRE, LES METHODES D'OPTIMISATION UTILISANT LES PLANS D'EXPERIENCE ET/OU L'ALGORITHME SIMPLEX. LA DEUXIEME PARTIE, CONCERNE L'APPLICATION DE CETTE TECHNIQUE POUR L'OPTIMISATION DE LA SEPARATION ET L'ETUDE DU MECANISME DE RETENTION EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE D'UNE SERIE DE BENZODIAZEPINES. L'EFFET DE 3 FACTEURS, DEBIT, COMPOSITION DE LA PHASE MOBILE ET TEMPERATURE DE LA COLONNE SUR DIVERSES CARACTERISTIQUES DE RETENTION A ETE ETUDIE. NOUS AVONS MONTRE QU'IL ETAIT POSSIBLE, POUR CHAQUE BENZODIAZEPINE, DE CALCULER POUR DIFFERENTES COMPOSITIONS DE LA PHASE MOBILE AVEC UN NOMBRE LIMITE D'EXPERIENCES LEUR ENTHALPIE ET ENTROPIE DE TRANSFERT DE LA PHASE MOBILE A LA PHASE STATIONNAIRE. A LA FIN DE CE CHAPITRE, NOUS NOUS SOMMES INTERESSES A L'ETUDE DE L'EFFICACITE DE LA SEPARATION DE 7 ESTERS DE L'ACIDE PARAHYDROXYBENZOIQUE. GRACE A UN MODELE RELIANT LA HAUTEUR EQUIVALENTE A UN PLATEAU THEORIQUE AUX 3 FACTEURS PRECEDENTS, NOUS AVONS DETERMINE LES CONDITIONS OPTIMALES QUI PERMETTENT LEUR SEPARATION. LE TROISIEME CHAPITRE CONCERNE L'APPLICATION DE CETTE METHODE A LA CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE. LA PREMIERE ETAPE EFFECTUEE DANS DES CONDITIONS ISOTHERMES A CONSISTE A ETUDIER SIMULTANEMENT L'EFFET DU DEBIT DE GAZ VECTEUR ET DE LA TEMPERATURE DE LA COLONNE SUR L'EFFICACITE D'UNE COLONNE CAPILLAIRE. NOUS AVONS ENSUITE ELUCIDE LE MECANISME DE RETENTION DE 7 ESTERS DE L'ACIDE PARAHYDROXYBENZOIQUE. NOUS AVONS MIS AU POINT DES RELATIONS ENTRE LA STRUCTURE MOLECULAIRE DE CES COMPOSES REPRESENTES PAR LEUR FACTEUR DE CONNECTIVITE #1#X ET LEUR ENTHALPIE ET ENTROPIE DE TRANSFERT. ENFIN, L'OPTIMISATION DE LA SEPARATION D'UN MELANGE DE PSORALENES A ETE REALISEE EN 62 MINUTES. LA DEUXIEME ETAPE A CONSISTE A TRANSPOSER LES RESULTATS PRECEDENTS EN GRADIENT DE TEMPERATURE, CECI NOUS PERMETTANT NOTAMMENT DE DETERMINER LES CONDITIONS OPTIMALES DE SEPARATION DE CES PSORALENES EN UN TEMPS BEAUCOUP PLUS COURT (7 MINUTES)

OPTIMISATION DE LA SEPARATION ET ETUDE THERMODYNAMIQUE DU MECANISME DE RETENTION DE MOLECULES EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE ET GAZEUSE

OPTIMISATION DE LA SEPARATION ET ETUDE THERMODYNAMIQUE DU MECANISME DE RETENTION DE MOLECULES EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE ET GAZEUSE PDF Author: Yves Claude Guillaume
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DANS CE TRAVAIL, NOUS METTONS EN EVIDENCE L'INTERET QUE REPRESENTE LES PLANS D'EXPERIENCE ET L'ALGORITHME SIMPLEX EN CHROMATOGRAPHIE. CETTE METHODE PERMET, EN EFFET, DE REDUIRE LE NOMBRE D'EXPERIENCES A REALISER POUR L'OPTIMISATION DE LA SEPARATION ET L'ETUDE DU MECANISME DE RETENTION DE DIVERSES MOLECULES. APRES AVOIR RAPPELE QUELQUES POINTS THEORIQUES SUR CE PROCEDE DE CALCUL, NOUS AVONS REPERTORIE, DANS LE PREMIER CHAPITRE DE CE MEMOIRE, LES METHODES D'OPTIMISATION UTILISANT LES PLANS D'EXPERIENCE ET/OU L'ALGORITHME SIMPLEX. LA DEUXIEME PARTIE, CONCERNE L'APPLICATION DE CETTE TECHNIQUE POUR L'OPTIMISATION DE LA SEPARATION ET L'ETUDE DU MECANISME DE RETENTION EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE D'UNE SERIE DE BENZODIAZEPINES. L'EFFET DE 3 FACTEURS, DEBIT, COMPOSITION DE LA PHASE MOBILE ET TEMPERATURE DE LA COLONNE SUR DIVERSES CARACTERISTIQUES DE RETENTION A ETE ETUDIE. NOUS AVONS MONTRE QU'IL ETAIT POSSIBLE, POUR CHAQUE BENZODIAZEPINE, DE CALCULER POUR DIFFERENTES COMPOSITIONS DE LA PHASE MOBILE AVEC UN NOMBRE LIMITE D'EXPERIENCES LEUR ENTHALPIE ET ENTROPIE DE TRANSFERT DE LA PHASE MOBILE A LA PHASE STATIONNAIRE. A LA FIN DE CE CHAPITRE, NOUS NOUS SOMMES INTERESSES A L'ETUDE DE L'EFFICACITE DE LA SEPARATION DE 7 ESTERS DE L'ACIDE PARAHYDROXYBENZOIQUE. GRACE A UN MODELE RELIANT LA HAUTEUR EQUIVALENTE A UN PLATEAU THEORIQUE AUX 3 FACTEURS PRECEDENTS, NOUS AVONS DETERMINE LES CONDITIONS OPTIMALES QUI PERMETTENT LEUR SEPARATION. LE TROISIEME CHAPITRE CONCERNE L'APPLICATION DE CETTE METHODE A LA CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE. LA PREMIERE ETAPE EFFECTUEE DANS DES CONDITIONS ISOTHERMES A CONSISTE A ETUDIER SIMULTANEMENT L'EFFET DU DEBIT DE GAZ VECTEUR ET DE LA TEMPERATURE DE LA COLONNE SUR L'EFFICACITE D'UNE COLONNE CAPILLAIRE. NOUS AVONS ENSUITE ELUCIDE LE MECANISME DE RETENTION DE 7 ESTERS DE L'ACIDE PARAHYDROXYBENZOIQUE. NOUS AVONS MIS AU POINT DES RELATIONS ENTRE LA STRUCTURE MOLECULAIRE DE CES COMPOSES REPRESENTES PAR LEUR FACTEUR DE CONNECTIVITE #1#X ET LEUR ENTHALPIE ET ENTROPIE DE TRANSFERT. ENFIN, L'OPTIMISATION DE LA SEPARATION D'UN MELANGE DE PSORALENES A ETE REALISEE EN 62 MINUTES. LA DEUXIEME ETAPE A CONSISTE A TRANSPOSER LES RESULTATS PRECEDENTS EN GRADIENT DE TEMPERATURE, CECI NOUS PERMETTANT NOTAMMENT DE DETERMINER LES CONDITIONS OPTIMALES DE SEPARATION DE CES PSORALENES EN UN TEMPS BEAUCOUP PLUS COURT (7 MINUTES)

APPLICATION DES TECHNIQUES DE MODELISATION MOLECULAIRE A L'ETUDE DES MECANISMES DE RETENTION EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE

APPLICATION DES TECHNIQUES DE MODELISATION MOLECULAIRE A L'ETUDE DES MECANISMES DE RETENTION EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE PDF Author: KAMAL.. AZZAOUI
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Pages : 230

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CE TRAVAIL A ETE CONSACRE A L'ETUDE DU MECANISME DE RETENTION EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE, CORRESPONDANT A DES SYSTEMES SPECIFIQUES ET POUR LESQUELS LES THEORIES CLASSIQUES SONT DIFFICILEMENT APPLICABLES. NOUS AVONS UTILISE UNE APPROCHE BASEE SUR DES ETUDES QUANTITATIVES DES RELATIONS STRUCTURE-RETENTION CHROMATOGRAPHIQUE (QUANTITATIVE STRUCTURE-RETENTION RELATIONSHIPS OU QSRR) AFIN D'EXPLIQUER LE MECANISME ET PREVOIR LA RETENTION DE PLUSIEURS FAMILLES DE COMPOSES. LE PRINCIPE DES QSRR REPOSE SUR LE CALCUL DE PLUSIEURS DESCRIPTEURS MOLECULAIRES (ELECTRONIQUES, STERIQUES, LIPOPHILIQUES) QUI SONT ENSUITE RELIES DIRECTEMENT PAR DES METHODES STATISTIQUES (REGRESSIONS MULTIPLES, ANALYSES EN COMPOSANTES PRINCIPALES, RESEAUX DE NEURONES), A UN INDICE DE RETENTION CHROMATOGRAPHIQUE. UNE ETUDE DE MODELISATION MOLECULAIRE EST NECESSAIRE POUR DETERMINER LES DESCRIPTEURS QUI DEPENDENT DE LA STRUCTURE ET DE LA CONFORMATION DE LA MOLECULE COMME LES SURFACES MOLECULAIRES ET LES POTENTIELS LIPOPHILIQUE ET/OU ELECTROSTATIQUE CODES SUR CES SURFACES. LE SUJET DE CETTE THESE EST CONSACRE A TROIS APPLICATIONS DE CES TECHNIQUES A DES CAS CONCRETS SOIT POUR PREDIRE LA RETENTION, SOIT POUR COMPRENDRE LE MECANISME MIS EN JEU. TOUT D'ABORD NOUS AVONS REALISE UNE ETUDE QUANTITATIVE DE LA RETENTION DE PRODUITS TESTS POUR 18 SYSTEMES CHROMATOGRAPHIQUES (3 PHASES STATIONNAIRES ET 6 PHASES MOBILES). CETTE ETUDE SE DEROULE EN DEUX ETAPES. DANS UN PREMIER TEMPS NOUS ANALYSERONS LES AXES QUE NOUS AVONS EXTRAITS DES ANALYSES FACTORIELLES PUIS DIRECTEMENT LES FACTEURS DE CAPACITE, CE QUI NOUS A PERMIS DE PROPOSER UN MECANISME QUANTIFIE PAR DES EQUATIONS DE PREDICTION DE LA RETENTION APPLICABLE POUR L'ENSEMBLE DES PHASES MOBILES UTILISEES. NOUS AVONS ENSUITE ETUDIE LA RETENTION DE COMPOSES AMPHIPHILES (ALKYLSUCRES) SUR UN SYSTEME A POLARITE DE PHASES INVERSEE. POUR DE TELS SYSTEMES CHROMATOGRAPHIQUES, LA RETENTION DES PRODUITS ETUDIES PRESENTE DES ANOMALIES. L'ETUDE DES CONFORMATIONS DE CES MOLECULES DANS UN SOLVANT POLAIRE ET UN SOLVANT APOLAIRE (MODELE DE SOLVATATION CONTINUE GB/SA) NOUS A PERMIS DE COMPRENDRE COMMENT CES COMPOSES CHANGENT DE CONFORMATION EN FONCTION DE LA COMPOSITION DE LA PHASE MOBILE ET POURQUOI LEUR RETENTION NE SUIT PLUS LES LOIS CLASSIQUES DE RETENTION EN PHASE INVERSE. NOUS AVONS CREE UN PROGRAMME GRACE AUQUEL LES ZONES LIPOPHILES ET LES ZONES HYDROPHILES SONT DELIMITEES SUR LA SURFACE DE CONNOLLY DE NOS PRODUITS. LES AIRES DES SURFACES LIPOPHILES SONT DIRECTEMENT RELIEES A UN PARAMETRE EXPERIMENTAL METTANT EN EVIDENCE LA QUANTIFICATION DE CETTE PROPRIETE. ENFIN NOUS AVONS CHERCHE A DETERMINER LA PHASE STATIONNAIRE LA PLUS APPROPRIEE POUR SEPARER DES ISOMERES DE POSITION DE DERIVES BENZODIOXINIQUES. NOUS AVONS CALCULE LES POTENTIELS ELECTROSTATIQUE ET LIPOPHILIQUE REPARTIS SUR LA SURFACE DE CONNOLLY DES DIFFERENTS ISOMERES. NOUS AVONS CONSTATE QUE CES ISOMERES SE DIFFERENCIENT NETTEMENT PAR LEURS PROPRIETES ELECTRONIQUES, PLUS QUE PAR LEURS PROPRIETES LIPOPHILES, CE QUI NOUS A AMENE A UN CHOIX RAISONNE D'UN SYSTEME OU LES INTERACTIONS ELECTRONIQUES PREDOMINENT

ETUDE ET DEVELOPPEMENT DE METHODES D'OPTIMISATION DE SEPARATION EN CHROMATOGRAPHIE

ETUDE ET DEVELOPPEMENT DE METHODES D'OPTIMISATION DE SEPARATION EN CHROMATOGRAPHIE PDF Author: ERIC.. CAVALLI
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Languages : fr
Pages : 120

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AVEC L'AUGMENTATION DES PERFORMANCES DU MATERIEL ET, SOUS LA PRESSION DES CONTRAINTES ECONOMIQUES, L'OPTIMISATION DES SEPARATIONS EN CHROMATOGRAPHIE EST DEVENUE UNE NECESSITE. APRES AVOIR DETAILLE LES METHODES D'OPTIMISATION LES PLUS COURAMMENT EMPLOYEES, ET AVOIR RAPPELE LES PRINCIPALES FORMULES MATHEMATIQUES UTILISEES EN CHROMATOGRAPHIE, NOUS AVONS ETUDIE ET DEVELOPPE LA TECHNIQUE DE TRACAGE DE CARTES DE RESOLUTION SUPERPOSEES (ORM EN ANGLAIS). EN CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE, NOUS AVONS D'ABORD COMPARE LES RESULTATS D'OPTIMISATION OBTENUS PAR LA METHODE DES DIAGRAMMES FENETRES ET CELLE DES CARTES DE RESOLUTION SUPERPOSEES TRACEES A L'AIDE DE DIVERSES FONCTIONS MESURANT LA SEPARATION DE DEUX COMPOSES. LES OPTIMA FOURNIS PAR LES DIVERSES METHODES SONT DIFFERENTS ET LA RESOLUTION SEMBLE LE MEILLEUR CRITERE D'EVALUATION DE LA SEPARATION POUR LES CARTES DE RESOLUTION SUPERPOSEES, A CONDITION DE TENIR COMPTE DE L'ELARGISSEMENT DES TACHES. A PARTIR DES RESULTATS PRECEDENTS, NOUS AVONS MIS AU POINT UN MOYEN D'ACCELERER 30 FOIS LE TRACAGE DES CARTES. NOUS AVONS EGALEMENT EFFECTUE UNE ETUDE DE L'INFLUENCE DE LA POSITION DES DEPOTS SUR LA PLAQUE (PAR RAPPORT A LA LIGNE D'IMMERSION) SUR L'EFFICACITE. LE TRAVAIL SUR LES CARTES DE RESOLUTION SUPERPOSEES EN CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE A ENSUITE ETE ADAPTE A LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE ET TESTE SUR DES HERBICIDES. ENFIN, POUR CREER UNE METHODE ORIGINALE D'OPTIMISATION DU TYPE CARTES DE RESOLUTION SUPERPOSEES POUR LA CHROMATOGRAPHIE GAZEUSE EN PROGRAMMATION DE TEMPERATURE, NOUS AVONS PROPOSE ET TESTE UNE METHODE ITERATIVE, SIMPLE, RAPIDE ET PRECISE POUR CALCULER LES TEMPS DE RETENTIONS. LES PREVISIONS SONT BONNES QUEL QUE SOIT LE TYPE DE PROGRAMME DE TEMPERATURE. NOTRE METHODE EST BASEE SUR UN DECOUPAGE THEORIQUE DE LA COLONNE EN ELEMENTS. PUIS, POUR LES CALCULS, CHACUN DES ELEMENTS EST CONSIDERE COMME ETANT DANS DES CONDITIONS ISOTHERMES ET A UNE TEMPERATURE INFERIEURE A CELLE DE L'ELEMENT SUIVANT. D'APRES NOTRE ETUDE, 20 A 50 ELEMENTS PAR METRE DE COLONNE PERMETTENT DES ESTIMATIONS SATISFAISANTES

Chromatographie

Chromatographie PDF Author: Encyclopaedia Universalis,
Publisher: Encyclopaedia Universalis
ISBN: 234100315X
Category : Science
Languages : fr
Pages : 78

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La chromatographie est une méthode d'analyse chimique (cf. chimie analytique ) consistant à séparer les constituants d'un mélange. Elle est utilisée aussi bien dans les services de recherche et développement que dans le domaine du contrôle. Son champ d'activité couvre les organismes d'État et le...

CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE

CHROMATOGRAPHIE EN PHASE LIQUIDE PDF Author: MOHAMED.. EL KHABCHI
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Languages : fr
Pages : 155

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LE GRADIENT D'ELUTION EST DEPUIS LONGTEMPS UNE TECHNIQUE ANALYTIQUE DE CHOIX EN CHROMATOGRAPHIE A POLARITE DE PHASE INVERSEE. SES PRINCIPAUX DOMAINES D'APPLICATION SONT L'ANALYSE DES MELANGES COMPLEXES ET LA SEPARATION DES BIOPOLYMERES (PEPTIDES, PROTEINES). PAR CONTRE, LE DEVELOPPEMENT DU GRADIENT D'ELUTION A L'ECHELLE PREPARATIVE N'EST QU'A CES DEBUTS ET L'OPTIMISATION DE SES PERFORMANCES NECESSITE UNE MEILLEURE COMPREHENSION DES PHENOMENES QUI REGISSENT LA SEPARATION DANS DES CONDITIONS DE SURCHARGES. CETTE ETUDE A ETE REALISEE A PARTIR DE CHROMATOGRAMMES THEORIQUES OBTENUS PAR CRAIGSIM, UN ALGORITHME DEVELOPPE AU LABORATOIRE QUI PERMET DE SIMULER LES PROFILS D'ELUTION CORRESPONDANT A L'INJECTION D'UN MELANGE BINAIRE. CES SIMULATIONS N'ONT REVELE AUCUN PHENOMENE INATTENDU ASSOCIE A LA SURCHARGE DE LA COLONNE ET AUX INTERFERENCES ENTRE SOLUTES. IL FAUT SIMPLEMENT SOULIGNER QU'EN GRADIENT D'ELUTION, LES EFFETS DE DEPLACEMENT ET D'ENTRAINEMENT SONT BEAUCOUP PLUS INTENSES QU'EN ELUTION ISOCRATIQUE. L'INTENSITE RELATIVE DE CES DEUX EFFETS DEPEND DU TYPE DU MELANGE A SEPARER ET DE SA COMPOSITION; ELLE CONDITIONNE AUSSI L'OPTIMISATION DES CONDITIONS D'INJECTION: IL EXISTE UNE CONCENTRATION OPTIMALE D'INJECTION TRES MARQUEE LORSQUE LE PHENOMENE D'ENTRAINEMENT EST PREPONDERANT C'EST-A-DIRE DANS LE CAS D'UN MELANGE MAJORITAIRE/MINORITAIRE DE SOLUTES CONVERGENT. L'ETUDE DES VARIATIONS DE CES CONDITIONS OPTIMALES D'INJECTION EN FONCTION, D'UNE PART, DES CARACTERISTIQUES DE LA COLONNE (VOLUME MORT, NOMBRE DE PLATEAUX THEORIQUES), D'AUTRE PART, DES CONDITIONS D'ELUTION (COMPOSITION DE LA PHASE MOBILE INITIALE, PENTE DU GRADIENT) A PERMIS DE DEFINIR UN PROTOCOLE DE TRANSPOSITION ANALYTIQUE PREPARATIVE DONT LA MISE EN UVRE A ETE ILLUSTREE PAR QUELQUES EXEMPLES. ENFIN NOUS AVONS EXAMINE LES PERFORMANCES DU FRACTIONNEMENT A LA VALLEE AFIN DE DEGAGER SES MEILLEURES CONDITIONS D'APPLICATION EN CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE PREPARATIVE DE LABORATOIRE

Etude de la détection de molécules organiques duales par microextraction en phase solide et chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse

Etude de la détection de molécules organiques duales par microextraction en phase solide et chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse PDF Author: Aude Delpuech
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Languages : fr
Pages : 252

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Face aux risques terroristes, il convient de développer une méthode de détection d’indices d’activités proliférantes (chimique et nucléaire) exploitable sur site. Cette thèse avait pour objectif d’optimiser l’échantillonnage par la technique de MicroExtraction en Phase Solide (fibre SPME) de seize molécules duales présentes à l’état de trace dans l’air. Cet échantillonnage repose sur l’établissement d’un équilibre thermodynamique biphasique (air/polymère) des composés cibles. La compréhension des mécanismes diffusionnels a nécessité des études mathématique et par simulation numérique qui ont infirmé les équations proposées par Pawliszyn. Nous proposons dans cette thèse, une nouvelle équation d’estimation du temps d’équilibre d’un composé pour une configuration de fibre donnée. Des cinétiques d’extraction ont été étudiées expérimentalement, ainsi que des estimations de constantes thermodynamiques, grâce à un générateur d’air étalon. De plus, une optimisation de l’analyse par chromatographie en phase gazeuse et spectrométrie de masse permet de détecter leur présence à de faibles teneurs dans l’air.

Stratégies d'optimisation de la séparation en chromatographie de phase gazeuse

Stratégies d'optimisation de la séparation en chromatographie de phase gazeuse PDF Author: André CROCQ
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Languages : fr
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Contribution à l'étude de la séparation des protéines par chromatographie d'échange d'ions en milieu complexe. Effet du poids moléculaire sur l'équilibre et la cinétique de rétention

Contribution à l'étude de la séparation des protéines par chromatographie d'échange d'ions en milieu complexe. Effet du poids moléculaire sur l'équilibre et la cinétique de rétention PDF Author: Manel Wakkel
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Languages : fr
Pages : 0

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La séparation et la purification de biomolécules à partir de milieux bruts, végétaux ou biologiques, est un sujet vaste etcomplexe. De sa compréhension et de son développement dépendent des enjeux industriels, et notamment le completdéveloppement des procédés biotechnologiques, les procédés de séparation, ou downstream processes, constituant environ 80% des coûts totaux de ces procédés. Ce travail se veut une contribution à ces problématiques. Il a été motivé par des résultatsobtenus au préalable dans le laboratoire qui montraient qu'il est possible de récupérer une protéine de très grande taille àpartir d'un milieu réel végétal par l'application d'une seule opération chromatographique (Kerfai, 2011). Suite à ce résultat,des hypothèses ont été énoncées, auxquelles ce travail essaie de répondre : quel(s) mécanisme(s) peuvent expliquer cerésultat ? Existe-t-il une localisation spécifique pour la fixation de la molécule sur l'échangeur d'ions qui rend plus simple etefficace sa récupération lors de l'étape d'élution ? Ainsi, notre objectif a été de progresser dans la connaissance des aspectsfondamentaux de la chromatographie d'échange d'ions appliquée à la séparation des protéines à partir d'un milieu brut.Notamment, l'influence de la présence d'autres protéines dans le milieu a été analysée, et ce dans le cas particulier deprotéines de poids moléculaire très différents, comme c'était le cas dans le travail précédemment cité. Des approches variées,théoriques et expérimentales à différentes échelles sur des milieux réels ou synthétiques, ont été appliquées et parfoisdéveloppées, pour essayer de répondre à ces questions. A l'échelle du procédé, une méthode statistique d'analyse desdonnées (Analyse en Composantes Principales ou ACP) a été menée, dont l'exploitation reste délicate. A l'échelle dulaboratoire, l'étude de l'équilibre et de la cinétique d'échange d'ions a été menée sur des solutions synthétiques de deuxprotéines : la sérum albumine bovine (BSA) (en tant que protéine de référence, couramment étudiée) et la ferritine (protéinede stockage du fer) de point isoélectrique proche de celui de la BSA mais de masse molaire plus élevée. Les résultatsmontrent que des modèles relativement classiques peuvent être appliqués, y compris pour les protéines de très grandes tailles,pour expliquer les aspects cinétiques de l'échange. Le couplage des flux de matière des protéines à l'intérieur des particulesde l'échangeur est très probable, malgré des diffusivités très différentes. Interpréter les résultats d'équilibre reste bien plusardu. La concentration en sel ou la présence de la BSA n'ont que très peu d'effet sur la rétention de la ferritine à l'équilibre.En revanche, la présence de la ferritine affecte très fortement la rétention de la BSA (pourtant plus favorable). Parmi lesphénomènes suggérés dans la littérature, l'effet Vroman a été recherché, mais il n'a pas été constaté dans le système pour lesconditions de travail utilisées. Les isothermes d'adsorption en conditions compétitives n'ont pas pu être simulées par lesmodèles habituels (comme l'isotherme multi-constituants de Langmuir), alors que celles des protéines seules sont tout à faitclassiques. En outre, un blocage partiel des pores de la résine par la ferritine reste probable, empêchant la diffusion de laBSA. Afin de vérifier ce dernier point, une méthodologie a été développée afin d'observer à l'échelle microscopique lesprofils de concentration des éléments représentatifs du système (P, Fe, Cl...) dans les particules. Cette méthode qui se trouveà un stade très avancé de développement, n'a pas encore permis de conclure faute de sensibilité suffisante des sondes àdisposition.

Chromatographie Liquide de Haute Performance en Chimie Des Protéines

Chromatographie Liquide de Haute Performance en Chimie Des Protéines PDF Author: Henri Wajcman
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Category : Amino acid sequence
Languages : en
Pages : 232

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Contribution à l'étude du mécanisme de séparation par chromatographie de partage en phase liquide

Contribution à l'étude du mécanisme de séparation par chromatographie de partage en phase liquide PDF Author: Zlatka Gallot
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Languages : fr
Pages : 162

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