DEVELOPPEMENT D'OUTILS LIPIDIQUES PARTIELLEMENT PERFLUORES POUR LA CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE DE PROTEINES. APPLICATION AUX RECEPTEURS DE L'ACIDE RETINOIQUE ET A DES PROTEINES MEMBRANAIRES PDF Download
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Author: FRANCK.. LACH
Publisher:
ISBN:
Category :
Languages : fr
Pages : 271
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Book Description
CE MANUSCRIT PRESENTE LA SYNTHESE ET LA CONCEPTION DE NOUVEAUX OUTILS CONCUS POUR LA CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE DE PROTEINES SUR FILM LIPIDIQUE SPECIFIQUE. NOUS AVONS DEVELOPPE, POUR LE CAS PARTICULIER DE PROTEINES SOLUBLES A LIGAND HYDROPHOBE (EN L'OCCURENCE LES RECEPTEURS DE L'ACIDE RETINOIQUE) DEUX CONCEPTS ORIGINAUX AFIN D'EVITER L'INSERTION DANS LA MONOCOUCHE D'UN TEL LIGAND GREFFE AU SUPPORT LIPIDIQUE. CES DEUX APPROCHES FONT INTERVENIR RESPECTIVEMENT DES AMPHIPHILES DITS THERMOAMBIVALENTS (AVEC UNE TEMPERATURE DE TRANSITION DE PHASE COMPRISE ENTRE 4 ET 20\C) CAPABLES, A FAIBLE TEMPERATURE, D'EXPULSER MECANIQUEMENT LE LIGAND DE LA MONOCOUCHE ET DES LIPIDES PARTIELLEMENT PERFLUORES POSSEDANT UN CARACTERE SUFFISAMMENT LIPOPHOBE POUR CONTRAINDRE LE LIGAND A S'EXPRIMER EN PHASE AQUEUSE ET RESTER ACCESSIBLE A LA PROTEINE. LES DEUX CONCEPTS ONT ETE VALIDES ET NOUS AVONS MIS EN EVIDENCE LE PREMIER EXEMPLE D'IMMOBILISATION A L'INTERFACE AIR/EAU D'UNE PROTEINE SOLUBLE A LIGAND HYDROPHOBE. CEPENDANT, JUSQU'ICI, NOS TENTATIVES DE CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE D'UN HETERODIMERE RAR/RXR ONT ABOUTI UNIQUEMENT A LA FORMATION D'ARRANGEMENTS COMPACTS DE PROTEINES. DANS LA SECONDE PARTIE DE CE TRAVAIL, NOUS AVONS TENTE DE TIRER PROFIT DES PROPRIETES DE SEGREGATION DE PHASES ENTRE FLUOROCARBURES ET HYDROCARBURES, POUR DEVELOPPER D'AUTRES SUPPORTS LIPIDIQUES FLUORES IMPERMEABLES AUX DETERGENTS, ET AINSI, UTILISABLES DANS DES PROTOCOLES DE CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE DE PROTEINES MEMBRANAIRES SUR FILM SPECIFIQUE. LA BONNE STABILITE DES AMPHIPHILES PREPARES EN PRESENCE DE DIVERS TENSIOACTIFS A PU ETRE DETERMINEE PAR ELLIPSOMETRIE. PAR AILLEURS, CETTE TECHNIQUE A PERMIS DE MONTRER SANS AMBIGUITE L'ADSORPTION RAPIDE D'UNE PROTEINE MEMBRANAIRE VEGETALE (UNE MONOOXYGENASE A CYTOCHROME P450) SUR UN TEL FILM D'AMPHIPHILES PARTIELLEMENT FLUORES ET NOUS AVONS RECEMMENT ENTREPRIS UNE SERIE D'EXPERIENCES DE CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE DE DEUX ENZYMES A CYTOCHROME P450 SUR LES SUPPORTS LIPIDIQUES FLUORES SYNTHETISES.
Author: FRANCK.. LACH
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Languages : fr
Pages : 271
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Book Description
CE MANUSCRIT PRESENTE LA SYNTHESE ET LA CONCEPTION DE NOUVEAUX OUTILS CONCUS POUR LA CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE DE PROTEINES SUR FILM LIPIDIQUE SPECIFIQUE. NOUS AVONS DEVELOPPE, POUR LE CAS PARTICULIER DE PROTEINES SOLUBLES A LIGAND HYDROPHOBE (EN L'OCCURENCE LES RECEPTEURS DE L'ACIDE RETINOIQUE) DEUX CONCEPTS ORIGINAUX AFIN D'EVITER L'INSERTION DANS LA MONOCOUCHE D'UN TEL LIGAND GREFFE AU SUPPORT LIPIDIQUE. CES DEUX APPROCHES FONT INTERVENIR RESPECTIVEMENT DES AMPHIPHILES DITS THERMOAMBIVALENTS (AVEC UNE TEMPERATURE DE TRANSITION DE PHASE COMPRISE ENTRE 4 ET 20\C) CAPABLES, A FAIBLE TEMPERATURE, D'EXPULSER MECANIQUEMENT LE LIGAND DE LA MONOCOUCHE ET DES LIPIDES PARTIELLEMENT PERFLUORES POSSEDANT UN CARACTERE SUFFISAMMENT LIPOPHOBE POUR CONTRAINDRE LE LIGAND A S'EXPRIMER EN PHASE AQUEUSE ET RESTER ACCESSIBLE A LA PROTEINE. LES DEUX CONCEPTS ONT ETE VALIDES ET NOUS AVONS MIS EN EVIDENCE LE PREMIER EXEMPLE D'IMMOBILISATION A L'INTERFACE AIR/EAU D'UNE PROTEINE SOLUBLE A LIGAND HYDROPHOBE. CEPENDANT, JUSQU'ICI, NOS TENTATIVES DE CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE D'UN HETERODIMERE RAR/RXR ONT ABOUTI UNIQUEMENT A LA FORMATION D'ARRANGEMENTS COMPACTS DE PROTEINES. DANS LA SECONDE PARTIE DE CE TRAVAIL, NOUS AVONS TENTE DE TIRER PROFIT DES PROPRIETES DE SEGREGATION DE PHASES ENTRE FLUOROCARBURES ET HYDROCARBURES, POUR DEVELOPPER D'AUTRES SUPPORTS LIPIDIQUES FLUORES IMPERMEABLES AUX DETERGENTS, ET AINSI, UTILISABLES DANS DES PROTOCOLES DE CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE DE PROTEINES MEMBRANAIRES SUR FILM SPECIFIQUE. LA BONNE STABILITE DES AMPHIPHILES PREPARES EN PRESENCE DE DIVERS TENSIOACTIFS A PU ETRE DETERMINEE PAR ELLIPSOMETRIE. PAR AILLEURS, CETTE TECHNIQUE A PERMIS DE MONTRER SANS AMBIGUITE L'ADSORPTION RAPIDE D'UNE PROTEINE MEMBRANAIRE VEGETALE (UNE MONOOXYGENASE A CYTOCHROME P450) SUR UN TEL FILM D'AMPHIPHILES PARTIELLEMENT FLUORES ET NOUS AVONS RECEMMENT ENTREPRIS UNE SERIE D'EXPERIENCES DE CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE DE DEUX ENZYMES A CYTOCHROME P450 SUR LES SUPPORTS LIPIDIQUES FLUORES SYNTHETISES.
Author: PIERRE.. HELD
Publisher:
ISBN:
Category :
Languages : fr
Pages : 322
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Book Description
LA CONNAISSANCE DE LA STRUCTURE TRIDIMENSIONNELLE DES RECEPTEURS DES RETINOIDES CONSTITUE UN OBJECTIF MAJEUR DE LA BIOLOGIE MODERNE, TANT LES PHENOMENES DANS LESQUELS L'ACIDE RETINOIQUE EST IMPLIQUE SONT NOMBREUX ET COMPLEXES. CE MANUSCRIT PRESENTE LA SYNTHESE ET L'UTILISATION DE NOUVEAUX OUTILS CONCUS POUR LA CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE DES RECEPTEURS DE L'ACIDE RETINOIQUE. LES LIGANDS DE CES RECEPTEURS ETANT TOUS HYDROPHOBES, DEUX APPROCHES ONT ETE DEVELOPPEES AFIN D'EVITER L'INSERTION DANS LA MONOCOUCHE D'UN TEL LIGAND GREFFE AU SUPPORT LIPIDIQUE. LA PREMIERE APPROCHE TIRE PROFIT DE LA NON-IDEALITE DES MELANGES D'HYDROCARBURES ET DE PERFLUOROCARBURES EN UTILISANT DE NOUVEAUX LIPIDES PARTIELLEMENT FLUORES A PROXIMITE DE LEUR TETE POLAIRE ET CAPABLES DE CONFINER LE LIGAND HYDROPHOBE A L'INTERFACE. LA SECONDE APPROCHE UTILISE DES LIPIDES DITS THERMOAMBIVALENTS, POSSEDANT UNE TEMPERATURE DE TRANSITION DE PHASE COMPRISE ENTRE 4C ET 20C ET CAPABLES, A FAIBLE TEMPERATURE, D'EXPULSER MECANIQUEMENT LE LIGAND DE LA MONOCOUCHE. CES LIPIDES ONT ETE SYNTHETISES, TESTES EN MONOCOUCHE PUIS GREFFES SUR DIVERSES POSITIONS D'UN LIGAND SPECIFIQUE DES RXR. LEUR CAPACITE A REPONDRE AU PROBLEME POSE A ETE EVALUEE PAR MICROSCOPIE ELECTRONIQUE. CE TRAVAIL PRESENTE AINSI LE PREMIER EXEMPLE D'IMMOBILISATION A L'INTERFACE AIR/EAU D'UNE PROTEINE SOLUBLE A LIGAND HYDROPHOBE, A SAVOIR UN HETERODIMERE RXR/RAR LIE A UNE SEQUENCE D'ADN (DR#5). LA SPECIFICITE DE L'INTERACTION A PU ETRE DEMONTREE. DES ESSAIS DE CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE ONT EGALEMENT ETE REALISES. ILS ONT PERMIS L'OBTENTION D'ARRANGEMENTS COMPACTS DE PROTEINES, SANS QUE CES DERNIERS N'EVOLUENT VERS LA FORMATION DE REELS CRISTAUX 2D.
Author: Julien Dauvergne
Publisher:
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Languages : fr
Pages : 0
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Book Description
Ce manuscrit décrit la synthèse et l'étude physico-chimique de tensioactifs innovants utilisés comme outils biochimiques pour le maintien et la cristallisation de protéines membranaires en solution aqueuse. Un premier chapitre présente les moyens techniques actuels à disposition pour la manipulation et l'étude des protéines membranaires ainsi que les problèmes rencontrés concernant leur inactivation et les alternatives actuelles. Une seconde partie décrit la synthèse d'un lipide hémifluoré possédant un ligand métallique spécifique, qui a été utilisé pour la formation d'un film de Langmuir. Les propriétés du film lipidique (stabilité et fluidité) ont été étudiées et des essais de cristallisation 2D suivant le concept interfacial ont été réalisés sur une protéine recombinante SUR1 « his tag » solubilisée dans des micelles de détergents hydrocarbonés. Le troisième chapitre aborde la notion d'amphiphilie faciale et décrit la synthèse de tensioactifs glucosidiques par « click chemistry » basés sur corps aromatique central. La persubsitution sélective de têtes hydrophiles sur les positions 1,3,5 et de parties hydrophobes sur les positions 2,4,6 apporte une amphiphilie aux molécules via une ségrégation faciale. Enfin, le dernier chapitre est dédié à l'étude du comportement et des propriétés physico-chimiques des tripodes amphiphiles faciaux en solution aqueuse grâce à différentes techniques : tensiométrie, diffusion de la lumière, CPLH,...
