MISE EN UVRE DE LA CHOROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE DANS LE CADRE DU SUIVI HORS LIGNE ET EN LIGNE DES PROTEINES DE CULTURES D'HYBRIDOMES. CARACTERISATION DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE ET COMPARAISON AVEC LE TEST ELISA PDF Download

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MISE EN UVRE DE LA CHOROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE DANS LE CADRE DU SUIVI HORS LIGNE ET EN LIGNE DES PROTEINES DE CULTURES D'HYBRIDOMES. CARACTERISATION DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE ET COMPARAISON AVEC LE TEST ELISA

MISE EN UVRE DE LA CHOROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE DANS LE CADRE DU SUIVI HORS LIGNE ET EN LIGNE DES PROTEINES DE CULTURES D'HYBRIDOMES. CARACTERISATION DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE ET COMPARAISON AVEC LE TEST ELISA PDF Author: Isabelle Gaillard
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Book Description
DEPUIS LA MISE AU POINT DES TECHNIQUES DE FORMATION DES LIGNEES D'HYBRIDOMES, DES EFFORTS IMPORTANTS SONT FOURNIS POUR AMELIORER LA PRODUCTIVITE DES ANTICORPS MONOCLONAUX ET POUR MIEUX COMPRENDRE LE METABOLISME CELLULAIRE. LES METHODES ANALYTIQUES JOUENT UN ROLE IMPORTANT DANS LE CONTROLE DES PROCEDES EN PERMETTANT LA DETERMINATION QUANTITATIVE ET QUALITATIVE DE PLUSIEURS PARAMETRES ET VARIABLES. L'OBJECTIF GENERAL DE CETTE ETUDE CONSISTE A CONTRIBUER A L'AMELIORATION DE LA MAITRISE DES BIOPROCEDES EN PROPOSANT UNE METHODE ANALYTIQUE CAPABLE DE QUANTIFIER LES PROTEINES PRESENTES DANS LES CULTURES D'HYBRIDOMES. AFIN D'ATTEINDRE CET OBJECTIF, LES POTENTIALITES DE L'HPLC ONT ETE TESTEES. LES PROTEINES CONSIDEREES DANS CETTE ETUDE SONT D'UNE PART, LES COMPOSES PROTEIQUES PROPRES AU MILIEU DE CULTURE ET D'AUTRE PART, LES ANTICORPS MONOCLONAUX SECRETES PAR LES CELLULES. LA PREMIERE PARTIE DE CETTE ETUDE PRESENTE L'OPTIMISATION DES CONDITIONS OPERATOIRES DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE. LES DEUX MODES CHROMATOGRAPHIQUES MIS A PROFIT SONT L'HPLC D'AFFINITE ET LA RP-HPLC. UNE ETUDE COMPARATIVE DES PERFORMANCES DE LA METHODE PAR HPLC ET DU TEST ELISA EST EXPOSEE DANS UNE SECONDE PARTIE. LA TROISIEME PARTIE CONCERNE L'APPLICATION DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE AUX SUIVIS DES PROTEINES DE CULTURES CELLULAIRES D'HYBRIDOMES. ENFIN, LA REALISATION COUPLAGE AUTOMATISE REACTEUR-ECHANTILLONNEUR-HPLC ET SON APPLICATION A LA DETERMINATION EN LIGNE DE LA CONCENTRATION DES IGG D'UNE CULTURE DISCONTINUE, CONSTITUENT LA DERNIERE PARTIE DE CE TRAVAIL

MISE EN UVRE DE LA CHOROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE DANS LE CADRE DU SUIVI HORS LIGNE ET EN LIGNE DES PROTEINES DE CULTURES D'HYBRIDOMES. CARACTERISATION DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE ET COMPARAISON AVEC LE TEST ELISA

MISE EN UVRE DE LA CHOROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE DANS LE CADRE DU SUIVI HORS LIGNE ET EN LIGNE DES PROTEINES DE CULTURES D'HYBRIDOMES. CARACTERISATION DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE ET COMPARAISON AVEC LE TEST ELISA PDF Author: Isabelle Gaillard
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DEPUIS LA MISE AU POINT DES TECHNIQUES DE FORMATION DES LIGNEES D'HYBRIDOMES, DES EFFORTS IMPORTANTS SONT FOURNIS POUR AMELIORER LA PRODUCTIVITE DES ANTICORPS MONOCLONAUX ET POUR MIEUX COMPRENDRE LE METABOLISME CELLULAIRE. LES METHODES ANALYTIQUES JOUENT UN ROLE IMPORTANT DANS LE CONTROLE DES PROCEDES EN PERMETTANT LA DETERMINATION QUANTITATIVE ET QUALITATIVE DE PLUSIEURS PARAMETRES ET VARIABLES. L'OBJECTIF GENERAL DE CETTE ETUDE CONSISTE A CONTRIBUER A L'AMELIORATION DE LA MAITRISE DES BIOPROCEDES EN PROPOSANT UNE METHODE ANALYTIQUE CAPABLE DE QUANTIFIER LES PROTEINES PRESENTES DANS LES CULTURES D'HYBRIDOMES. AFIN D'ATTEINDRE CET OBJECTIF, LES POTENTIALITES DE L'HPLC ONT ETE TESTEES. LES PROTEINES CONSIDEREES DANS CETTE ETUDE SONT D'UNE PART, LES COMPOSES PROTEIQUES PROPRES AU MILIEU DE CULTURE ET D'AUTRE PART, LES ANTICORPS MONOCLONAUX SECRETES PAR LES CELLULES. LA PREMIERE PARTIE DE CETTE ETUDE PRESENTE L'OPTIMISATION DES CONDITIONS OPERATOIRES DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE. LES DEUX MODES CHROMATOGRAPHIQUES MIS A PROFIT SONT L'HPLC D'AFFINITE ET LA RP-HPLC. UNE ETUDE COMPARATIVE DES PERFORMANCES DE LA METHODE PAR HPLC ET DU TEST ELISA EST EXPOSEE DANS UNE SECONDE PARTIE. LA TROISIEME PARTIE CONCERNE L'APPLICATION DE LA METHODE CHROMATOGRAPHIQUE AUX SUIVIS DES PROTEINES DE CULTURES CELLULAIRES D'HYBRIDOMES. ENFIN, LA REALISATION COUPLAGE AUTOMATISE REACTEUR-ECHANTILLONNEUR-HPLC ET SON APPLICATION A LA DETERMINATION EN LIGNE DE LA CONCENTRATION DES IGG D'UNE CULTURE DISCONTINUE, CONSTITUENT LA DERNIERE PARTIE DE CE TRAVAIL

Validation d'une technique de chromatographie liquide bi-dimensionnelle pour une étude sur les protéines microsomiales hépatiques et développement de colonnes chromatographiques en silicium mésoporeux

Validation d'une technique de chromatographie liquide bi-dimensionnelle pour une étude sur les protéines microsomiales hépatiques et développement de colonnes chromatographiques en silicium mésoporeux PDF Author: Cyrille Bruneau
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Languages : fr
Pages : 122

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Book Description
Ce travail a été effectué au Département Physique et Métrologie des Oscillateurs (L.P.M.O.), du laboratoire FEMTO-ST, UMR 6174 du CNRS, en collaboration avec l'U.F.R. des Sciences Médicales et Pharmaceutiques de l'Université de Franche-Comté. Ces travaux de thèse ont été encadrés par le professeur Lysiane RICHERT et le docteur Wilfrid BOIREAU (Chargé de Recherches au C.N.R.S.). Des colonnes chromatographiques en silicium mésoporeux ont été conçues et fabriquées. Après avoir appris à utiliser des techniques de salle blanche (RIE, Pulvérisation cathodique, photolithographie...), j'ai procédé aux diverses étapes de fabrication à partir d'un substrat en silicium dopé au phosphore. Leur caractérisation a été effectuée à l'aide de microscopes électroniques à balayage et optiques. Une séparation chromatographique de deux molécules a été réussie en utilisant le pouvoir séparateur de la silice. La deuxième partie de mes travaux de thèse s'inscrit dans le cadre d'une étude de Biologie Cellulaire et de recherches en protéomique. En collaboration avec l'U.F.R. des Sciences Médicales et Pharmaceutiques, les effets d'un traitement à la Nafénopine (un proliférateur de péroxisomes) sur les protéines microsomiales des cellules hépatiques de rats ont été étudié. Après la lyse des cellules hépatiques des sujets et la récupération des protéines microsomiales, l'échantillon est injecté dans un appareil de chromatographie liquide bidimensionnelle conçu pour la protéomique, le ProteomeLab PF2D. Cet appareil sépare un mélange de protéines suivant deux types de chromatographie liquide; suivant leur point isoélectrique par chromatofocusing et suivant leur hydrophobicité par RP-HPLC. Après étude différentielle des cartes protéiques obtenues, un bio-indicateur a été découvert et identifié par Western Blotting. Il s'agit du Cytochrome P450 4Al.