CRISTALLISATION ET CARACTERISATION DE PROTEINES PDF Download
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Author: MONIKA.. BUDAYOVA
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Category :
Languages : fr
Pages : 264
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Book Description
L'OBJECTIF DE CETTE THESE EST DE CONTRIBUER A LA COMPREHENSION DES MECANISMES DE CROISSANCE ET DES INTERACTIONS MISES EN JEU LORS DE LA CRISTALLISATION DES PROTEINES EN SOLUTION. NOUS AVONS ETUDIE CINQ PROTEINES DE MASSES MOLECULAIRES ET DE NATURE DIFFERENTES (DE 6 A 306KDA) DANS DIFFERENTS MILIEUX DE CRISTALLISATION (SELS, POLYETHYLENE GLYCOLS, GEL D'AGAROSE, EAU LEGERE ET EAU LOURDE). TROIS DES PROTEINES ETUDIEES, L'INHIBITEUR DE LA TRYPSINE PANCREATIQUE DU BOEUF, L'-AMYLASE PANCREATIQUE DU PORC ET L'ASPARTATE TRANSCARBAMYLASE, SONT LES PROTEINES MODELES POUR L'ETUDE DE LA CRISTALLISATION ET DES INTERACTIONS EN SOLUTION. LES DEUX AUTRES SYSTEMES, L'ENDOGLUCANASE A ET L'INTERFERON HUMAIN, SONT DES PROTEINES, QUI N'AVAIENT JAMAIS DONNE LIEU A DES ETUDES POUSSEES EN CRISTALLOGENESE. LE TRAVAIL DE CETTE THESE EST DEVELOPPE AUTOUR DE DEUX AXES PRINCIPAUX CONCERNANT L'ETUDE DE LA CRISTALLISATION DES PROTEINES EN SOLUTION D'UNE PART (RECHERCHE DES CONDITIONS DE CRISTALLISATION, DETERMINATION DES DIAGRAMMES DE PHASES, MESURE DES CINETIQUES DE CROISSANCE) ET L'ETUDE DE CARACTERISATION DES PROTEINES EN SOLUTION D'AUTRE PART (CARACTERISATION DE L'ETAT DES MOLECULES DE PROTEINES EN SOLUTION : PURETE, FACTEUR DE FORME, INTERACTIONS). IL NOUS A PERMIS DE CONFIRMER QUE LA CRISTALLISATION DES PROTEINES EST GOUVERNEE PAR LES MEMES LOIS PHYSICO-CHIMIQUES QUE LA CRISTALLISATION DES PETITES MOLECULES. NOUS AVONS AINSI PU MONTRER QU'IL EXISTE DES CORRELATIONS ENTRE INTERACTIONS EN SOLUTION D'UNE PROTEINE, SA PURETE, SA SOLUBILITE, SA CROISSANCE ET LA NATURE ET LA STRUCTURE DE SON MILIEU DE CROISSANCE. UN AUTRE APPORT DE CETTE THESE EST L'EXTENSION DES RESULTATS OBTENUS AVEC LES PROTEINES MODELES, ANNONCES CI-DESSUS, A L'ENDOGLUCANASE A ET A L'INTERFERON HUMAIN.
Author: MONIKA.. BUDAYOVA
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Languages : fr
Pages : 264
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L'OBJECTIF DE CETTE THESE EST DE CONTRIBUER A LA COMPREHENSION DES MECANISMES DE CROISSANCE ET DES INTERACTIONS MISES EN JEU LORS DE LA CRISTALLISATION DES PROTEINES EN SOLUTION. NOUS AVONS ETUDIE CINQ PROTEINES DE MASSES MOLECULAIRES ET DE NATURE DIFFERENTES (DE 6 A 306KDA) DANS DIFFERENTS MILIEUX DE CRISTALLISATION (SELS, POLYETHYLENE GLYCOLS, GEL D'AGAROSE, EAU LEGERE ET EAU LOURDE). TROIS DES PROTEINES ETUDIEES, L'INHIBITEUR DE LA TRYPSINE PANCREATIQUE DU BOEUF, L'-AMYLASE PANCREATIQUE DU PORC ET L'ASPARTATE TRANSCARBAMYLASE, SONT LES PROTEINES MODELES POUR L'ETUDE DE LA CRISTALLISATION ET DES INTERACTIONS EN SOLUTION. LES DEUX AUTRES SYSTEMES, L'ENDOGLUCANASE A ET L'INTERFERON HUMAIN, SONT DES PROTEINES, QUI N'AVAIENT JAMAIS DONNE LIEU A DES ETUDES POUSSEES EN CRISTALLOGENESE. LE TRAVAIL DE CETTE THESE EST DEVELOPPE AUTOUR DE DEUX AXES PRINCIPAUX CONCERNANT L'ETUDE DE LA CRISTALLISATION DES PROTEINES EN SOLUTION D'UNE PART (RECHERCHE DES CONDITIONS DE CRISTALLISATION, DETERMINATION DES DIAGRAMMES DE PHASES, MESURE DES CINETIQUES DE CROISSANCE) ET L'ETUDE DE CARACTERISATION DES PROTEINES EN SOLUTION D'AUTRE PART (CARACTERISATION DE L'ETAT DES MOLECULES DE PROTEINES EN SOLUTION : PURETE, FACTEUR DE FORME, INTERACTIONS). IL NOUS A PERMIS DE CONFIRMER QUE LA CRISTALLISATION DES PROTEINES EST GOUVERNEE PAR LES MEMES LOIS PHYSICO-CHIMIQUES QUE LA CRISTALLISATION DES PETITES MOLECULES. NOUS AVONS AINSI PU MONTRER QU'IL EXISTE DES CORRELATIONS ENTRE INTERACTIONS EN SOLUTION D'UNE PROTEINE, SA PURETE, SA SOLUBILITE, SA CROISSANCE ET LA NATURE ET LA STRUCTURE DE SON MILIEU DE CROISSANCE. UN AUTRE APPORT DE CETTE THESE EST L'EXTENSION DES RESULTATS OBTENUS AVEC LES PROTEINES MODELES, ANNONCES CI-DESSUS, A L'ENDOGLUCANASE A ET A L'INTERFERON HUMAIN.
Author: Fabrice Gorrec
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Languages : fr
Pages : 90
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La cristallographie aux rayons X permet la détermination des structures tridimensionnelles de macromolécules biologiques ainsi que de leurs complexes à haute résolution. Cependant, la cristallisation des protéines est un phénomène totalement aléatoire et peu de cristaux sont généralement produits, de plus leur qualité et résistance sont souvent insuffisantes. Ces travaux visent à présenter les différentes étapes pour résoudre des structures de protéines ainsi que deux développements innovants pour formuler des solutions de criblage pour la cristallisation (appelés Pi et MORPHEUS).
Author: Chantal Abergel
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Languages : fr
Pages : 185
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LA RADIOCRISTALLOGRAPHIE, EST ACTUELLEMENT LA METHODE DE CHOIX POUR LA DETERMINATION DES STRUCTURES TRIDIMENSIONNELLES DES MACROMOLECULES BIOLOGIQUES. CETTE METHODE SUSCITE DEPUIS QUELQUES ANNEES UN INTERET CROISSANT DANS LE MONDE ACADEMIQUE ET INDUSTRIEL. LA PREMIERE ETAPE EST D'OBTENIR DES CRISTAUX DE QUALITE ET DE DIMENSION SUFFISANTE POUR LA DIFFRACTION DES RAYONS X. PARMI LES DIFFERENTES METHODES DE CRISTALLISATION DES PROTEINES NOUS AVONS CHOISI D'UTILISER ET DE DECRIRE LA TECHNIQUE DE DIFFUSION EN PHASE VAPEUR ET PLUS PARTICULIEREMENT LA GOUTTE SUSPENDUE APPLIQUEE A QUELQUES PROTEINES. NOUS PRESENTONS EGALEMENT UNE METHODE DE DETERMINATION DES CONDITIONS DE CRISTALLISATION BASEE SUR LE PLAN D'ANALYSE FACTORIEL INCOMPLET DECRIT PAR CERTER & FILS. NOUS AVONS PU CRISTALLISER UN CERTAIN NOMBRE DE PROTEINES EN UTILISANT LA COMBINAISON DE CETTE METHODE ET DE LA TECHNIQUE DE DIFFUSION EN PHASE VAPEUR. LA CRISTALLISATION DES PROTEINES NECESSITE UN GRAND NOMBRE D'EXPERIENCES, REPRODUCTIBLES D'UNE FOIS SUR L'AUTRE. POUR CETTE RAISON, NOUS AVONS REALISES EN COLLABORATION PEU COUTEUX ET ADAPTE AUX PROTEINES. DE PLUS, DEUX AUTRES ETUDES VISANT A MIEUX COMPRENDRE LA CRISTALLISATION DES PROTEINES, ONT ETE REALISEES AU LABORATOIRE. IL S'AGIT, D'UNE PART, DE LA CONTAMINATION CONTROLEE DE LA CRISTALLISATION D'UN LYSOZYME PAR DES MOLECULES APPARENTEES. CE SYSTEME FAIT INTERVENIR QUATRE LYSOZYMES DE BLANC D'UF, NE DIFFERENT QUE PAR QUELQUES RESIDUS DANS LEUR SEQUENCE PRIMAIRE. LA RIBONUCLEASE A DE BUF NON APPARENTEE AUX PROTEINES PRECEDENTES, NOUS A SERVI DE TEMOIN. AFIN DE MIEUX CERNER LES MECANISMES DE LA CRISTALLISATION DES MACROMOLECULES BIOLOGIQUES, ET DANS LE BUT D'OBTENIR DES CRISTAUX DE MEILLEUR QUALITE, NOUS AVONS REALISE DES ETUDES EN MICROGRAVITE GRACE A UNE COLLABORATION AVEC LE LABORATOIRE DE C.E. BUGG A L'UNIVERSITE D'ALABAMA AT BIRMINGHAM (USA). NOUS EXAMINERONS LES RESULTATS OBTENUS SUR DEUX
Author: Terese M. Bergfors
Publisher: Internat'l University Line
ISBN: 0972077448
Category : Medical
Languages : en
Pages : 505
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Author: GERVAISE.. MOSSER
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Languages : fr
Pages :
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UNE ETUDE SYSTEMATIQUE DES CONDITIONS DE CRISTALLISATION BIDIMENSIONNELLE (2D) SUR FILM LIPIDIQUE A ETE REALISEE SUR LE SYSTEME MODELE SOUS-UNITE B DE LA TOXINE DU CHOLERA MONOSIALOGANGLIOSIDE GM1 PAR MICROSCOPIE ELECTRONIQUE, ANALYSE D'IMAGES ET MESURES DE PRESSION DE SURFACE. LA RELATION EXISTANT ENTRE LES DEUX TYPES DE RESEAUX, DE GEOMETRIE HEXAGONALE ET RECTANGULAIRE, DECRITS PAR D. LUDWIG ET AL. A ETE ANALYSEE PAR LES METHODES CRISTALLOGRAPHIQUES D'ANALYSE D'IMAGES. L'ANALYSE D'IMAGES D'OBJETS HYDRATES-CONGELES DIFFRACTANT A 9 A DE RESOLUTION A PERMIS DE METTRE EN EVIDENCE DES DETAILS STRUCTURAUX A L'INTERIEUR DE CHAQUE SOUS-UNITE B DE LA TOXINE. DES CLICHES DE DIFFRACTION ELECTRONIQUE PRESENTANT DES TACHES DE DIFFRACTION JUSQU'A UNE RESOLUTION DE 4 A TEMOIGNENT DE LA QUALITE DES CRISTAUX OBTENUS PAR CRISTALLISATION SUR FILM LIPIDIQUE. PAR AILLEURS, DES CRISTAUX 2D D'ANNEXINE-V ONT ETE OBTENUS SUR FILMS LIPIDIQUES EN PRESENCE D'IONS CALCIUM. L'ANALYSE D'IMAGE REVELE QUE LES CRISTAUX SONT COMPOSES DE TRIMERES D'ANNEXINE-V. CHAQUE MOLECULE A UNE FORME ALLONGEE D'ENVIRON 65 A PAR 20 A ET EST COMPOSEE DE DEUX DOMAINES DE TAILLE SIMILAIRE, DECALES L'UN PAR RAPPORT A L'AUTRE. CHAQUE DOMAINE EST COMPOSE DE DEUX SOUS-DOMAINES. LES DONNEES SUGGERENT QUE LES 4 DOMAINES PROTEIQUES REPRESENTENT LES 4 SEGMENTS REPETITIFS DE 70 ACIDES AMINES COMMUNS A L'ENSEMBLE DES ANNEXINES. CETTE STRUCTURE EST COMPAREE A CELLE DETERMINEE EN L'ABSENCE DE LIPIDES PAR CRISTALLOGRAPHIE DES RAYONS X ET PAR R. HUBER ET AL. CETTE COMPARAISON A PERMIS DE DETERMINER L'ORIENTATION DE LA PROTEINE PAR RAPPORT A LA MEMBRANE ET A INDIQUE QUE LA FIXATION DE LA PROTEINE AUX LIPIDES N'IMPLIQUE QU'UN TRES FAIBLE REMANIEMENT STRUCTURAL
Author: Hartmut Michel
Publisher: CRC Press
ISBN: 1351088173
Category : Medical
Languages : en
Pages : 343
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The precise knowledge of the structure of biological macromolecules forms the basis of understanding their function and their mechanism of action. It also lays the foundation for rational protein and drug design. The only method to obtain this knowledge is still crystallography. At present, the structures of about 400 proteins are known at or nearly at atomic proteins. However, only two of them are membrane proteins or complexes of the membrane proteins. The reasons for the difference is not the crystals of membrane proteins resists forming special problems when being analysed. The reason is that the membrane proteins resist into forming into well-ordered crystals. The intention of this book is to help to produce well-ordered crystals proteins and to provide guidelines, it is aimed at both biochemists and protein crystallographer‘s.
Author: Adel Kadri
Publisher:
ISBN:
Category :
Languages : fr
Pages : 260
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La pression, paramètre physique comme la température, est de plus en plus utilisée en cristallogenèse, plus récemment dans le domaine des protéines. La présence du gel d'agarose dans le milieu est d'importance capitale pour la cristallisation. Dans cette thèse, nous avons entrepris le couplage de la pression avec l'utilisation du gel d'agarose. Nous avons réussi à cristalliser deux nouvelles protéines sous pression hydrostatique. La thaumatine (jusqu'à 250 MPa) et le lysozyme de dinde ou TeL (jusqu'à 100 MPa). Le lysozyme de poule ou HeL (jusqu'à 75MPa) sert de modèle, mais sa cristallisation sous l'influence de ces deux paramètres est aussi une première. Dans un premier temps, nous avons abordé l'effet de la pression sur la cristallisation de ces trois protéines en présence du gel d'agarose et avons déterminé certains paramètres physico-chimiques du processus de cristallisation (nombre et taille des cristaux, solubilité, sursaturation et volume de cristallisation). Le couplage du pH avec la pression nous a permis de mieux comprendre ce processus via des diagrammes de phases tridimensionnels. Nous avons ainsi observé que, lorsque la pression augmente, le polymorphisme des cristaux de HeL se situe à des pH plus acides. La pression affecte aussi la cinétique de nucléation et de croissance des cristaux des trois protéines en favorisant généralement leur nucléation et en défavorisant leur croissance. Les paramètres thermodynamiques de cristallisation (enthalpie, entropie, énergie libre) montrent que chaque protéine se comporte différemment, en fonction du milieu de cristallisation et de l'effet de la température sur la solubilité. L'analyse topographique et structurale (qualité cristalline et nombre de molécules d'eau liées à la couche d'hydratation) des cristaux des trois protéines obtenus sous pression montre que ce paramètre joue un rôle majeur en favorisant la croissance des cristaux de bonne qualité suite à la désorganisation et la dissociation des noyaux mal formés. La résolution structurale de la thaumatine à 150 MPa permet de cerner la raison pour laquelle la pression diminue la solubilité par le biais du nombre de molécules d'eau sous pression (233 à 150 MPa contre 282 à 0,1 MPa) diminuant ainsi la solvatation. Enfin une corrélation a été trouvée entre les paramètres physico-chimiques, thermodynamiques et les caractéristiques cristallographiques.
Author: STEPHANIE.. FINET
Publisher:
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Category :
Languages : fr
Pages : 255
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LE COMPORTEMENT MICROSCOPIQUE DES MACROMOLECULES BIOLOGIQUES EN SOLUTION EST GOUVERNE PAR DES POTENTIELS D'INTERACTION (CUR DUR, ELECTROSTATIQUE, VAN DER WAALS, EFFETS HYDROPHOBES, HYDRATATION) A COURTE ET MOYENNE PORTEE (QUELQUES ANGSTROMS A QUELQUES CENTAINES D'ANGSTROMS). CES POTENTIELS D'INTERACTION CONFERENT A LA SOLUTION SES PROPRIETES MACROSCOPIQUES (TRANSPARENCE, VISCOSITE) ET INTERVIENNENT DANS LES TRANSITIONS DE PHASE ET LES PROCESSUS DE CRISTALLISATION. NOUS AVONS UTILISE LA DIFFUSION DES RAYONS X AUX PETITS ANGLES (DXPA) AVEC, COMME SYSTEMES MODELES, DES SOLUTIONS DE LYSOZYME DE BLANC D'UF DE POULE ET DE PROTEINES DU CRISTALLIN DE L'IL DE VEAU (GAMMA- ET ALPHA-CRISTALLINES). CETTE TECHNIQUE A PERMIS LA CARACTERISATION DES INTERACTIONS ENTRE PROTEINES GLOBULAIRES EN SOLUTION EN FONCTION DE PLUSIEURS PARAMETRES PHYSICO-CHIMIQUES TELS QUE LE PH, LA TEMPERATURE, LA FORCE IONIQUE ET L'ADDITION DE PEG. CES POTENTIELS SONT COMPOSES D'UN TERME DE SPHERES DURES, D'UNE REPULSION COLOMBIENNE ET D'UNE ATTRACTION A COURTE PORTEE, PROBABLEMENT DE VAN DER WAALS. L'ADDITION DE SEL INDUIT UNE ATTRACTION SUPPLEMENTAIRE QUI SUIT L'ORDRE DES SERIES DE HOFMEISTER. DE PLUS, L'ADDITION DE PEG INDUIT UNE ATTRACTION DE DEPLETION, A COURTE PORTEE EGALEMENT. LA COMBINAISON DE LA DXPA ET DES TECHNIQUES DE GEL PERMET DE CARACTERISER LES ESPECES MOLECULAIRES EN INTERACTION EN SOLUTION PENDANT LA CROISSANCE CRISTALLINE. POUR LE LYSOZYME AVEC NACL, NOUS AVONS MONTRE QU'IL N'EXISTE PAS D'ESPECE INTERMEDIAIRE ENTRE LE MONOMERE ET LE CRISTAL. EN COUPLANT LA DXPA (FACTEURS DE STRUCTURE EXPERIMENTAUX) ET LES SIMULATIONS NUMERIQUES (FACTEURS DE STRUCTURE THEORIQUES), LES PARAMETRES DE MODELES DEVELOPPES EN MECANIQUE STATISTIQUE SONT AJUSTES ET PERMETTENT DE REMONTER AUX POTENTIELS D'INTERACTION THEORIQUES CORRESPONDANTS. CES RESULTATS NOUS PERMETTENT DE RELIER LES INTERACTIONS AUX CONDITIONS DE CRISTALLISATION DES PROTEINES ET D'AMELIORER LA PREDICTION DE LEURS DIAGRAMMES DE PHASE.
Author: Naomi E. Chayen
Publisher: Internat'l University Line
ISBN: 9780972077439
Category : Science
Languages : en
Pages : 300
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Author: NOUREDINE.. SADAOUI
Publisher:
ISBN:
Category :
Languages : fr
Pages : 204
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NOUS AVONS CONCU ET CONSTRUIT UNE CELLULE AUTOMATIQUE POUR LA CRISTALLISATION DES PROTEINES CAPABLE D'UN FONCTIONNEMENT AUTONOME. NOUS NOUS SOMMES BASES SUR LA METHODE CLASSIQUE DE DIFFUSION EN PHASE VAPEUR EN GOUTTES SUSPENDUES, ASSISES ET SANDWICH. NOTRE SOUCI PRINCIPAL ETAIT CELUI DE LA PRECISION ET LA REPRODUCTIBILITE DES EXPERIENCES DE CRISTALLISATION AU PRIX DE LA RAPIDITE DES PREPARATIONS, CE QUI A CONDUIT A UNE CADENCE DE FONCTIONNEMENT DE DIX PLAQUES PAR JOUR. DEUX TYPES DE PLAQUES STANDARDS PEUVENT ETRE UTILISES (ACA CRYSTAL-PLATE OU LINBRO). LES RESERVOIRS PEUVENT ETRE FORMES D'UN MELANGE CONTENANT JUSQU'A DIX SOLUTIONS, ET LES GOUTTES D'UN MELANGE ALLANT JUSQU'A TROIS SOLUTIONS. LA PROTEINE EST MAINTENUE DANS UN SUPPORT THERMOSTATE A UNE TEMPERATURE SELECTIONNEE PAR L'UTILISATEUR. LA CELLULE EST AGENCEE AUTOUR D'UN ROBOT CINQ AXES EQUIPE D'UN OUTIL PIPETTEUR, UNE VENTOUSE POUR LA MANIPULATION DES LAMELLES ET D'UN OUTIL POUR LA SAISIE DES PLAQUES DE CRISTALLISATION. LE GRAISSAGE ET LE RETOURNEMENT DES LAMELLES SONT EFFECTUES SUR DEUX POSTES PREVUS A CET EFFET. L'ENSEMBLE EST PILOTE PAR UN PC COMPATIBLE EQUIPE D'UN LOGICIEL PERMETTANT LA PREPARATION ET LE SUIVI DES EXPERIENCES. TOUS LES DETAILS ET RESULTATS LIES A CES PROTOCOLES DE CRISTALLISATION SONT ARCHIVES. CECI PERMETTRA DE DEVELOPPER DES STRATEGIES POUR L'OPTIMISATION DE LA QUALITE DES CRISTAUX
